作者mediumturtle (中头)
看板Biotech
标题[问题] 想问一下5'RACE意义为何?
时间Thu Jul 29 18:02:55 2010
现在只是读书 只懂学理不太懂实验
所以想问一下 5'RACE的意义为何呢?
以一段incomplete cDNA为primer
对mRNA进行反转录补足5'端
可是这样3'端不也是残缺吗@.@??
示意图
mRNA
5'────────── 3'
3'── 5'
incomplete cDNA
↓
5'────────── 3'
3'──────── 5'
" ? "
跑完之後 前面那段呢???
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.223.234.107
1F：→ singren:再跑3'RACE定序就好啦~ 07/29 18:59
抱歉再问一下
我用的是weaver的molecular biology
里面只有提到5'RACE
想问一下如果用3'RACE是怎样呢??
从网路上查似乎是用含有poly(T)的adapter去跑反转录
既然如此为何最後5'又不要了呢? @.@
我是看这里的
http://www.tcmon.com/Article/UploadFiles_0702/200811/20081105145344588.jpg
2F：→ turtle24:把5'RACE产物跟3'RACE产物混合再PCR就得到cDNA全长了 07/29 20:17
可以混合!?
意思是说用3端和5端夹出来是吗?
那想问一下做3'RACE的时候不是已经反转录整个target mRNA了吗?
为何接下的步骤只要3端而已?
※ 编辑: mediumturtle 来自: 61.223.234.107 (07/29 20:28)
3F：推 Ianthegood:exact transcription start site 07/29 21:17
4F：→ mediumturtle:那如何获得cDNA全长呢? 07/29 22:22
5F：→ turtle24:以前的技术没办法区分3'RACE有没有全部做完吧 会缺5' 07/29 23:06
6F：→ turtle24:5'RACE会缺3'的部份 两个产物互补起来就有全长了呀 07/29 23:07
7F：→ mediumturtle:好我知道了...thanks 07/29 23:37
8F：→ vixen:因为RT时用dT的关系, 常常是缺5'端啊, 3'比较不会缺 08/03 22:21
9F：推 ralph31567:主要目的不是就在找TIS~有没有3'端要看就实验需要搂 08/03 23:47