這個月中向別的實驗室要了人類內皮transformed 細胞株 EAhy926 cells 拿來的時候是培養的人先養在75T flask 隔天換medium (對方說必須要換) medium是自己買的、自己加添加物 medium的營養條件都是根據對方給的去配 (Hyclone DMEM liquid,含high glucose, L-glutamine， 另外添加ECGS + HAT + 15% FBS + 1% P/S) (他們是用powder配DMEM，但因為有點狀況，緊急之下先訂commercial的medium) subculture兩天後 細胞幾乎全滿 (8~10分滿) 然後1:3分成三盤 (10cm dish) 0.025% trypsin-EDTA 37度 2mins,離心 1200rpm 3 mins 細胞就都離下來了 flask也加了一些medium讓殘留的少量細胞可以繼續長 兩天後細胞大概八九分滿做第二次subculture 把其中比較滿的兩盤平均凍成兩管 有預留大概一盤三成的細胞量繼續用10cm dish culture 0.025% trypsin-EDTA 37度 2~3mins,離心 1200~1300rpm 4~5 mins (對方是說他都trypsin 2 mins, 離心1200rpm, 5mins) 但是細胞就漸漸長的不好了 對方有告訴我這個細胞很好長.. 一盤滿大概300~400萬 (75T flask) 大概分80~100萬都長很快，兩三天滿 50萬就可以長了，只是長比較慢，大概要長一周 但是我星期一凍細胞那天subculture之後，到今天細胞都還沒有五、六分滿 分盤的隔天看細胞的形狀看起來也不太好 反而flask只是固定換medium，雖然長得慢，但是細胞的型態都很正常， 也看得出來有在慢慢長 medium 10cm dish跟75T flask都是用一樣的PBS跟medium 所以應該不會是這個問題 我有去問當初給細胞的人 他也想不出來為什麼 不過他們家都是75T flask養這株細胞，要做實驗那一次才分出來用dish養， 因此之後就不會再續養，也不清楚是否會是因為dish的影響 請問細胞會因為養在flask或dish不同就長得比較不好嗎？ 如果有會是因為coating的差異嗎？還是其他緣故呢？ 可以請大家給點意見或建議嗎？ 我真的找不出原因>"< 謝謝!!! --

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