这个月中向别的实验室要了人类内皮transformed 细胞株 EAhy926 cells 拿来的时候是培养的人先养在75T flask 隔天换medium (对方说必须要换) medium是自己买的、自己加添加物 medium的营养条件都是根据对方给的去配 (Hyclone DMEM liquid,含high glucose, L-glutamine， 另外添加ECGS + HAT + 15% FBS + 1% P/S) (他们是用powder配DMEM，但因为有点状况，紧急之下先订commercial的medium) subculture两天後 细胞几乎全满 (8~10分满) 然後1:3分成三盘 (10cm dish) 0.025% trypsin-EDTA 37度 2mins,离心 1200rpm 3 mins 细胞就都离下来了 flask也加了一些medium让残留的少量细胞可以继续长 两天後细胞大概八九分满做第二次subculture 把其中比较满的两盘平均冻成两管 有预留大概一盘三成的细胞量继续用10cm dish culture 0.025% trypsin-EDTA 37度 2~3mins,离心 1200~1300rpm 4~5 mins (对方是说他都trypsin 2 mins, 离心1200rpm, 5mins) 但是细胞就渐渐长的不好了 对方有告诉我这个细胞很好长.. 一盘满大概300~400万 (75T flask) 大概分80~100万都长很快，两三天满 50万就可以长了，只是长比较慢，大概要长一周 但是我星期一冻细胞那天subculture之後，到今天细胞都还没有五、六分满 分盘的隔天看细胞的形状看起来也不太好 反而flask只是固定换medium，虽然长得慢，但是细胞的型态都很正常， 也看得出来有在慢慢长 medium 10cm dish跟75T flask都是用一样的PBS跟medium 所以应该不会是这个问题 我有去问当初给细胞的人 他也想不出来为什麽 不过他们家都是75T flask养这株细胞，要做实验那一次才分出来用dish养， 因此之後就不会再续养，也不清楚是否会是因为dish的影响 请问细胞会因为养在flask或dish不同就长得比较不好吗？ 如果有会是因为coating的差异吗？还是其他缘故呢？ 可以请大家给点意见或建议吗？ 我真的找不出原因>"< 谢谢!!! --

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