作者mzac1b (Goodday)
看板Biotech
標題[求救] 請問western 結果產生反白之band該如何改進?
時間Wed Jul 21 15:32:16 2010
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
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最近我蒐集幾批樣品請人幫我跑 western
結果跑出來一些雜band很明顯
反而預期位置的band變成反白
而且反白的趨勢還符合我預期的趨勢 (有兩批樣品有同樣情形)
也就是原本預期越強的band反白越大坨
據說2 抗加太強也可能會導致這樣
想請問高手們
我遇到這樣的情形是不是真的是訊號太強所導致?
如果是怎麼改進比較適合?
感謝不吝賜教
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 210.60.122.14
1F：→ turtle24:來張圖看看 通常是sample太多 07/21 15:48
2F：→ oooops:訊號太強+1 07/21 15:57
3F：推 aggaci:訊號太強！1、2抗都縮短時間 07/21 16:04
4F：→ m6xup6:1.抗體濃度可以下少一點 2.壓片的時間縮短 07/21 17:39
5F：推 lsalber:減少樣品量,2抗濃度為正解,縮短壓片時間沒有用... 07/21 21:11
6F：→ genep:不想再做一次,直接用較弱的ECL也可以. 07/21 21:50
7F：→ mzac1b:還想問說反白的原理是什麼? 算是類似曝光嗎? 感謝~ 07/22 07:38
8F：推 icome:個人猜測應該是enzyme濃度遠超過substrate造成反應不能 07/22 09:19
9F：推 cecik:是不是membrane燒掉了? membrane上面有沒有黃色的band出現? 07/22 10:49
10F：推 chvkimo:反白原理應該就是底片過度曝光吧 那麼造成曝光過度原因是 07/22 13:00
11F：→ chvkimo:啥 就是樓上各位大大講的那些原因都可能 07/22 13:00
12F：推 inchew:訊號太強+1, 1抗.2抗.ECL.sample濃都都減少,壓短一點時間試 07/22 14:03
13F：推 icome:我用CCD照的也有反白現象 似乎不是底片的原因 07/22 16:47
14F：→ genep:反白是訊號太強 ECL消耗光了 反而沒訊號. 所以底片CCD都空白 07/22 21:17
15F：推 lsalber:樓上正解 07/22 21:20
16F：推 gryou:訊號太強！ 07/23 00:12
17F：推 silentence:燒掉了 看你antibody的濃度要再稀釋還是降sample量 07/28 04:13