作者mzac1b (Goodday)
看板Biotech
标题[求救] 请问western 结果产生反白之band该如何改进?
时间Wed Jul 21 15:32:16 2010
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章----
最近我蒐集几批样品请人帮我跑 western
结果跑出来一些杂band很明显
反而预期位置的band变成反白
而且反白的趋势还符合我预期的趋势 (有两批样品有同样情形)
也就是原本预期越强的band反白越大坨
据说2 抗加太强也可能会导致这样
想请问高手们
我遇到这样的情形是不是真的是讯号太强所导致?
如果是怎麽改进比较适合?
感谢不吝赐教
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 210.60.122.14
1F：→ turtle24:来张图看看 通常是sample太多 07/21 15:48
2F：→ oooops:讯号太强+1 07/21 15:57
3F：推 aggaci:讯号太强！1、2抗都缩短时间 07/21 16:04
4F：→ m6xup6:1.抗体浓度可以下少一点 2.压片的时间缩短 07/21 17:39
5F：推 lsalber:减少样品量,2抗浓度为正解,缩短压片时间没有用... 07/21 21:11
6F：→ genep:不想再做一次,直接用较弱的ECL也可以. 07/21 21:50
7F：→ mzac1b:还想问说反白的原理是什麽? 算是类似曝光吗? 感谢~ 07/22 07:38
8F：推 icome:个人猜测应该是enzyme浓度远超过substrate造成反应不能 07/22 09:19
9F：推 cecik:是不是membrane烧掉了? membrane上面有没有黄色的band出现? 07/22 10:49
10F：推 chvkimo:反白原理应该就是底片过度曝光吧 那麽造成曝光过度原因是 07/22 13:00
11F：→ chvkimo:啥 就是楼上各位大大讲的那些原因都可能 07/22 13:00
12F：推 inchew:讯号太强+1, 1抗.2抗.ECL.sample浓都都减少,压短一点时间试 07/22 14:03
13F：推 icome:我用CCD照的也有反白现象 似乎不是底片的原因 07/22 16:47
14F：→ genep:反白是讯号太强 ECL消耗光了 反而没讯号. 所以底片CCD都空白 07/22 21:17
15F：推 lsalber:楼上正解 07/22 21:20
16F：推 gryou:讯号太强！ 07/23 00:12
17F：推 silentence:烧掉了 看你antibody的浓度要再稀释还是降sample量 07/28 04:13