作者FENOR (FENOR)
看板Biotech
標題[求救] 不是做ip 卻染出heavy and light chain
時間Sun Jul 18 23:52:13 2010
小弟用的vector是pcDNA4A/TO/myc-his
然後我把目標的BirA gene insert進去後，transfect到293T內進行表現。
接著用了anti-myc的抗體進行一抗，最後進行了成色
然後問題來了:明明不是做IP，可是卻染出了heavy chain和light chain，
然後目標的蛋白卻毫無表現，該怎麼解釋@@
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◆ From: 140.112.135.172
※ 編輯: FENOR 來自: 140.112.135.172 (07/18 23:52)
1F：→ turtle24:anti-myc怎會抓heavy chain和light chain? 07/19 00:12
2F：→ turtle24:假設你是做Western blot, sample裡也沒抗體吧 07/19 00:13
3F：→ turtle24:既然沒抗體的話,從哪判斷是heavy chain和light chain? 07/19 00:13
4F：→ turtle24:還是說把background認成什麼東西了 07/19 00:15
5F：→ FENOR:是對著marker看的，兩條剛好是在56KD和1XKD的位置 07/19 00:23
6F：→ FENOR:然後目標是在37KD 可是卻甚麼都沒有 07/19 00:24
7F：→ FENOR:另外作的空VECTOR控制組也染到了一樣的東西 07/19 00:24
8F：→ turtle24:所以疑似heavy chain和light chain的東西是被二抗亂認嗎? 07/19 01:28
9F：→ turtle24:單獨染二抗的話 還會出現這兩條嗎 07/19 01:28
10F：推 tsubasawolfy:56附近那個應該是內生性的myc 不會平白無故生出HC LC 07/19 01:49
11F：→ tsubasawolfy:出來.再者293T是隨便送隨便做就一堆..先確定你的 07/19 01:52
12F：→ tsubasawolfy:plasmid序列都對..接著確認送的方法的確送的進去 07/19 01:53
13F：→ bluecsky:我也滿好奇你怎麼確定是HC LC..單看WB位置不能篤定吧 07/19 06:55
14F：→ FENOR:我確定過全部是in frame的，也是正確的東西= =" 07/19 10:28
15F：→ dennisag:我以前染myc,也會染到很強的background,一樣也是293T 07/19 12:06
16F：→ dennisag:但怎麼樣也都不會覺得是hc跟lc, 07/19 12:07
17F：→ dennisag:而且,一般的二抗不會一起認到HC跟LC... 07/19 12:07
18F：→ FENOR:今天會重做一個沒有任何transfect的@@看看是不是內生的myc 07/20 10:18
19F：→ bigcat24:我覺得 myc 抗體很弱~ 既然有his 換個抗體抓抓看~ 07/22 12:44