作者FENOR (FENOR)
看板Biotech
标题[求救] 不是做ip 却染出heavy and light chain
时间Sun Jul 18 23:52:13 2010
小弟用的vector是pcDNA4A/TO/myc-his
然後我把目标的BirA gene insert进去後，transfect到293T内进行表现。
接着用了anti-myc的抗体进行一抗，最後进行了成色
然後问题来了:明明不是做IP，可是却染出了heavy chain和light chain，
然後目标的蛋白却毫无表现，该怎麽解释@@
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◆ From: 140.112.135.172
※ 编辑: FENOR 来自: 140.112.135.172 (07/18 23:52)
1F：→ turtle24:anti-myc怎会抓heavy chain和light chain? 07/19 00:12
2F：→ turtle24:假设你是做Western blot, sample里也没抗体吧 07/19 00:13
3F：→ turtle24:既然没抗体的话,从哪判断是heavy chain和light chain? 07/19 00:13
4F：→ turtle24:还是说把background认成什麽东西了 07/19 00:15
5F：→ FENOR:是对着marker看的，两条刚好是在56KD和1XKD的位置 07/19 00:23
6F：→ FENOR:然後目标是在37KD 可是却甚麽都没有 07/19 00:24
7F：→ FENOR:另外作的空VECTOR控制组也染到了一样的东西 07/19 00:24
8F：→ turtle24:所以疑似heavy chain和light chain的东西是被二抗乱认吗? 07/19 01:28
9F：→ turtle24:单独染二抗的话 还会出现这两条吗 07/19 01:28
10F：推 tsubasawolfy:56附近那个应该是内生性的myc 不会平白无故生出HC LC 07/19 01:49
11F：→ tsubasawolfy:出来.再者293T是随便送随便做就一堆..先确定你的 07/19 01:52
12F：→ tsubasawolfy:plasmid序列都对..接着确认送的方法的确送的进去 07/19 01:53
13F：→ bluecsky:我也满好奇你怎麽确定是HC LC..单看WB位置不能笃定吧 07/19 06:55
14F：→ FENOR:我确定过全部是in frame的，也是正确的东西= =" 07/19 10:28
15F：→ dennisag:我以前染myc,也会染到很强的background,一样也是293T 07/19 12:06
16F：→ dennisag:但怎麽样也都不会觉得是hc跟lc, 07/19 12:07
17F：→ dennisag:而且,一般的二抗不会一起认到HC跟LC... 07/19 12:07
18F：→ FENOR:今天会重做一个没有任何transfect的@@看看是不是内生的myc 07/20 10:18
19F：→ bigcat24:我觉得 myc 抗体很弱~ 既然有his 换个抗体抓抓看~ 07/22 12:44