作者liner76 (歐~天呀)
看板Biotech
標題[閒聊] 轉cDNA定量的方式請教
時間Tue Jul 13 21:31:51 2010
今天我老闆突然對要口試的學姊問說
你們抽完total RNA,轉成cDNA後怎麼進行定量
我學姊說,我們使用同一管的cDNA,取等量體積
一個去做PCR 測目標gene的量，
另外再用 Actin的primer去夾同體積的ｃＤＮＡ來定量
結果............
我老闆和另外一位老師，提出說
不是應該同一管cDNA，裡頭分別加入目標gene的primer和control的primer才對嗎？
..............
以上是奇怪的論點，想請教版上的前輩，真的有人這樣做嗎？
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.47.212.206
1F：推 youshould:要先看目標gene的和control的primer會不會互相干擾才可 07/13 22:06
2F：→ liner76:所以說只要不會cross link，理論上方法可行？但實際上真的 07/13 22:23
3F：→ liner76:有前輩是這樣進行實驗的嗎？或是早就用real-time啦 XD 07/13 22:24
4F：→ soom:是有這樣用沒錯, multiplex PCR 07/14 00:09
5F：推 aggaci:理論上是這樣，但primer之間會干擾！taq效率也會變差 07/14 00:38
6F：推 gerpy:請問一下，target primer跟internal control primer的效率 07/14 09:59
7F：→ gerpy:不同要怎麼做才能準確定量 07/14 10:00
8F：→ gerpy:理論上，還是要用Multiplex，因為這可以保證你的pcr mix是用 07/14 10:01
9F：→ gerpy:相同的東西 07/14 10:01
10F：→ NKTcell:有的primer的確會互相干擾 所以 保險起見是分開做 07/14 10:51
11F：→ NKTcell:我有遇過加在一起 目標基因P不出來 control可以 07/14 10:52
12F：→ NKTcell:但是目標基因跟control的primer分開p之後 就很正常 07/14 10:52
13F：推 yaliu:除了primer外，其他先mix後分裝，再加入primer PCR 07/14 11:14
14F：→ yaliu:這樣應該可以算一樣吧？分裝就算取樣誤差應該也不會差到哪？ 07/14 11:15
15F：推 iceking:推樓上的作法 07/14 14:31
16F：推 icome:可以試試看 不過通常會跑multiplex PCR的primer有特別設計吧 07/14 17:23