作者liner76 (欧~天呀)
看板Biotech
标题[闲聊] 转cDNA定量的方式请教
时间Tue Jul 13 21:31:51 2010
今天我老板突然对要口试的学姊问说
你们抽完total RNA,转成cDNA後怎麽进行定量
我学姊说,我们使用同一管的cDNA,取等量体积
一个去做PCR 测目标gene的量，
另外再用 Actin的primer去夹同体积的ｃＤＮＡ来定量
结果............
我老板和另外一位老师，提出说
不是应该同一管cDNA，里头分别加入目标gene的primer和control的primer才对吗？
..............
以上是奇怪的论点，想请教版上的前辈，真的有人这样做吗？
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.47.212.206
1F：推 youshould:要先看目标gene的和control的primer会不会互相干扰才可 07/13 22:06
2F：→ liner76:所以说只要不会cross link，理论上方法可行？但实际上真的 07/13 22:23
3F：→ liner76:有前辈是这样进行实验的吗？或是早就用real-time啦 XD 07/13 22:24
4F：→ soom:是有这样用没错, multiplex PCR 07/14 00:09
5F：推 aggaci:理论上是这样，但primer之间会干扰！taq效率也会变差 07/14 00:38
6F：推 gerpy:请问一下，target primer跟internal control primer的效率 07/14 09:59
7F：→ gerpy:不同要怎麽做才能准确定量 07/14 10:00
8F：→ gerpy:理论上，还是要用Multiplex，因为这可以保证你的pcr mix是用 07/14 10:01
9F：→ gerpy:相同的东西 07/14 10:01
10F：→ NKTcell:有的primer的确会互相干扰 所以 保险起见是分开做 07/14 10:51
11F：→ NKTcell:我有遇过加在一起 目标基因P不出来 control可以 07/14 10:52
12F：→ NKTcell:但是目标基因跟control的primer分开p之後 就很正常 07/14 10:52
13F：推 yaliu:除了primer外，其他先mix後分装，再加入primer PCR 07/14 11:14
14F：→ yaliu:这样应该可以算一样吧？分装就算取样误差应该也不会差到哪？ 07/14 11:15
15F：推 iceking:推楼上的作法 07/14 14:31
16F：推 icome:可以试试看 不过通常会跑multiplex PCR的primer有特别设计吧 07/14 17:23