作者championelmo (elmo軒)
看板Biotech
標題[解惑]關於transient 和 stable transfection的差別
時間Mon Jul 12 19:26:35 2010
最近在討論transfection的問題
我手上的vector是pCMV-SPORT6 好像只能做transient
因為我之前都是做細菌 最近開始著少要做細胞 所以這部分去看書查資料
這兩者的差別主要是在stable transfection的基因能夠嵌入染色體中
分裂時也會影響到子代 是永久的
幾個問題
要如何知道我的載體是stable 還是 transient
是不是看載體上面的基因呢?
在查資料的過程中我看到了有所謂reporter gene
以及selective gene
我大致了解這兩個基因的功能
但哪一個是決定他是stable還是transient的關鍵呢?
還是都不是?
而我手上的pCMV-SPORT6 我確定他沒有細胞可以做篩選的gene
但是reporter gene這部分我不清楚
請大家可以幫我解惑一下嗎?
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◆ From: 140.124.250.117
1F：推 liuse:沒selection marker 那就不能篩 07/12 20:48
2F：→ championelmo:所以不能篩就是只能做transient transfection是嗎? 07/12 21:45
3F：推 aggaci:可以，必須co-transfect帶有selection marker的plasmid 07/12 22:17
4F：推 aceliang:自己放selective gene阿。co-transfect有風險。 07/13 14:40
5F：推 icome:之所以會變stable是因為外源基因隨機插入chromosome 07/13 16:31
6F：→ icome:你要做的事情是 用抗生素把這些有插入外源基因的細胞篩選出 07/13 16:32
7F：→ icome:reporter gene應該是做promoter assay會用到的 07/13 16:33
8F：→ icome:要嘛自己加一段IRES+抗抗生素基因到vector上 07/13 16:35
9F：→ icome:不然就再把你的基因P出來或切出來接到有抗抗生素的vector 07/13 16:35
10F：→ championelmo:喔喔 我想我懂了 謝謝大家 07/13 19:50