作者championelmo (elmo轩)
看板Biotech
标题[解惑]关於transient 和 stable transfection的差别
时间Mon Jul 12 19:26:35 2010
最近在讨论transfection的问题
我手上的vector是pCMV-SPORT6 好像只能做transient
因为我之前都是做细菌 最近开始着少要做细胞 所以这部分去看书查资料
这两者的差别主要是在stable transfection的基因能够嵌入染色体中
分裂时也会影响到子代 是永久的
几个问题
要如何知道我的载体是stable 还是 transient
是不是看载体上面的基因呢?
在查资料的过程中我看到了有所谓reporter gene
以及selective gene
我大致了解这两个基因的功能
但哪一个是决定他是stable还是transient的关键呢?
还是都不是?
而我手上的pCMV-SPORT6 我确定他没有细胞可以做筛选的gene
但是reporter gene这部分我不清楚
请大家可以帮我解惑一下吗?
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◆ From: 140.124.250.117
1F：推 liuse:没selection marker 那就不能筛 07/12 20:48
2F：→ championelmo:所以不能筛就是只能做transient transfection是吗? 07/12 21:45
3F：推 aggaci:可以，必须co-transfect带有selection marker的plasmid 07/12 22:17
4F：推 aceliang:自己放selective gene阿。co-transfect有风险。 07/13 14:40
5F：推 icome:之所以会变stable是因为外源基因随机插入chromosome 07/13 16:31
6F：→ icome:你要做的事情是 用抗生素把这些有插入外源基因的细胞筛选出 07/13 16:32
7F：→ icome:reporter gene应该是做promoter assay会用到的 07/13 16:33
8F：→ icome:要嘛自己加一段IRES+抗抗生素基因到vector上 07/13 16:35
9F：→ icome:不然就再把你的基因P出来或切出来接到有抗抗生素的vector 07/13 16:35
10F：→ championelmo:喔喔 我想我懂了 谢谢大家 07/13 19:50