※ 引述《championelmo (elmo軒)》之銘言： : 實驗室第一次要做enzyme assay : 我們手上拿的載體是pET-32系列 又有在改過 : 之前再做western blot時使用的抗體是有專一性很高的 S-protein kit : 有抓到 有顯示出band : 之後因為要做純化 為了省錢就選用his tag : 以plasmid map來看 我們的目標蛋白是接在s protein後面 但是前面不遠處(約差200bp) : 就是his tag的序列了 應該也是抓得到目標蛋白 : 但是現在通column的結果 量很少 跑膠有band 但有其他的雜band(不是單一band) : 想說提高imidazole的濃度 卻又沒有band了 : 想請問有經驗的朋友 如果遇到這種情形還有哪些方法我可以去嚐試 : 不希望非得要換S˙tag (太貴了...) 可能的原因很多 如果是採用 his tag純化的話 或許可以試試在Western Blotting時使用anti-his tag antibody測試his tag 是否有被擋住 如果his tag沒有問題的話 那可能是單純的表現量不夠 解決辦法就像版友回的以量取勝 多養一些菌液以增加回收量 關於雜質的問題 請問你提高imidazole濃度是提高到多少 我記得resine的說明書中提到不要超過60 mg/L 建議是以高量低濃度反覆多沖洗幾次觀察是否有改善 希望對你有幫助 --

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