※ 引述《championelmo (elmo轩)》之铭言： : 实验室第一次要做enzyme assay : 我们手上拿的载体是pET-32系列 又有在改过 : 之前再做western blot时使用的抗体是有专一性很高的 S-protein kit : 有抓到 有显示出band : 之後因为要做纯化 为了省钱就选用his tag : 以plasmid map来看 我们的目标蛋白是接在s protein後面 但是前面不远处(约差200bp) : 就是his tag的序列了 应该也是抓得到目标蛋白 : 但是现在通column的结果 量很少 跑胶有band 但有其他的杂band(不是单一band) : 想说提高imidazole的浓度 却又没有band了 : 想请问有经验的朋友 如果遇到这种情形还有哪些方法我可以去嚐试 : 不希望非得要换S˙tag (太贵了...) 可能的原因很多 如果是采用 his tag纯化的话 或许可以试试在Western Blotting时使用anti-his tag antibody测试his tag 是否有被挡住 如果his tag没有问题的话 那可能是单纯的表现量不够 解决办法就像版友回的以量取胜 多养一些菌液以增加回收量 关於杂质的问题 请问你提高imidazole浓度是提高到多少 我记得resine的说明书中提到不要超过60 mg/L 建议是以高量低浓度反覆多冲洗几次观察是否有改善 希望对你有帮助 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 125.227.225.142