作者pkpkc (小皮)
看板Biotech
標題[求救] 貼附型細胞繼代後要多久才能處理?
時間Mon Jul 12 00:17:34 2010
最近在做病毒及藥物處理細胞的實驗
細胞株是Vero及Huh7
流程大致上是這樣：
以Trypsin-EDTA作繼代，不離心，直接加入含FBS的medium作中和
種一定數量的細胞，等隔天貼附後就作病毒感染或是藥物處理
但結果都不太理想
像是Huh7以藥物處理作positive control也沒有想要的表現情形
甚至未處理的對照組似乎表現的比有處理的還多
是因為細胞剛貼附沒多久尚未穩定就立刻做實驗的關係嗎？
如果是的話，那繼代完多久再處理會比較好？
以Vero作病毒的定量，測定結果似乎也遠低於實際的濃度
老闆是說可能是Trypsin影響到細胞膜，造成病毒較難感染
所以叫我用PBS-EDTA作繼代就好
目前正在重養一批新的Vero，打算只用EDTA繼代
不過凍起來前也是以Trypsin處理的，不知會不會一樣
請各位前輩們幫幫我吧
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 125.232.184.130
1F：推 leoblack:你們的FBS有沒有做補體去活性的動作!?且建議去trypsin 07/12 01:21
2F：→ leoblack:另外~病毒感染時建議先wash後~再加入含virus的sup 07/12 01:22
3F：→ leoblack:純的病毒液處理至少1hr(依病毒不同而有異)後回補medium 07/12 01:24
4F：→ leoblack:且建議回補後FBS濃度是原先的1/2~因為FBS會阻礙病毒感染 07/12 01:25
5F：→ leoblack:所以病毒處理後才以1/2 FBS濃度,讓新生成的病毒重複感染 07/12 01:26
6F：→ pkpkc:謝謝 07/12 13:15
7F：推 leoblack:請教一下~你們是使用什麼病毒?!不同的病毒有不同感染法 07/12 14:32