作者pkpkc (小皮)
看板Biotech
标题[求救] 贴附型细胞继代後要多久才能处理?
时间Mon Jul 12 00:17:34 2010
最近在做病毒及药物处理细胞的实验
细胞株是Vero及Huh7
流程大致上是这样：
以Trypsin-EDTA作继代，不离心，直接加入含FBS的medium作中和
种一定数量的细胞，等隔天贴附後就作病毒感染或是药物处理
但结果都不太理想
像是Huh7以药物处理作positive control也没有想要的表现情形
甚至未处理的对照组似乎表现的比有处理的还多
是因为细胞刚贴附没多久尚未稳定就立刻做实验的关系吗？
如果是的话，那继代完多久再处理会比较好？
以Vero作病毒的定量，测定结果似乎也远低於实际的浓度
老板是说可能是Trypsin影响到细胞膜，造成病毒较难感染
所以叫我用PBS-EDTA作继代就好
目前正在重养一批新的Vero，打算只用EDTA继代
不过冻起来前也是以Trypsin处理的，不知会不会一样
请各位前辈们帮帮我吧
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 125.232.184.130
1F：推 leoblack:你们的FBS有没有做补体去活性的动作!?且建议去trypsin 07/12 01:21
2F：→ leoblack:另外~病毒感染时建议先wash後~再加入含virus的sup 07/12 01:22
3F：→ leoblack:纯的病毒液处理至少1hr(依病毒不同而有异)後回补medium 07/12 01:24
4F：→ leoblack:且建议回补後FBS浓度是原先的1/2~因为FBS会阻碍病毒感染 07/12 01:25
5F：→ leoblack:所以病毒处理後才以1/2 FBS浓度,让新生成的病毒重复感染 07/12 01:26
6F：→ pkpkc:谢谢 07/12 13:15
7F：推 leoblack:请教一下~你们是使用什麽病毒?!不同的病毒有不同感染法 07/12 14:32