作者championelmo (elmo軒)
看板Biotech
標題[求救] 請問his tag的純化方法
時間Fri Jul 9 18:12:36 2010
實驗室第一次要做enzyme assay
我們手上拿的載體是pET-32系列 又有在改過
之前再做western blot時使用的抗體是有專一性很高的 S-protein kit
有抓到 有顯示出band
之後因為要做純化 為了省錢就選用his tag
以plasmid map來看 我們的目標蛋白是接在s protein後面 但是前面不遠處(約差200bp)
就是his tag的序列了 應該也是抓得到目標蛋白
但是現在通column的結果 量很少 跑膠有band 但有其他的雜band(不是單一band)
想說提高imidazole的濃度 卻又沒有band了
想請問有經驗的朋友 如果遇到這種情形還有哪些方法我可以去嚐試
不希望非得要換S˙tag (太貴了...)
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◆ From: 140.124.250.117
1F：推 liuse:量很少 一樣用量取勝 用大量的bacteria誘導產生蛋白 07/09 19:56
2F：→ liuse:來提高濃度 讓Ni-resin beads盡量saturate 07/09 19:57
3F：推 aggaci:若是確定有6H...那沒抓到原因應該是被擋住..... 07/09 22:32
4F：推 asolitary:把his-taq從N端移到C端試試看吧 07/09 22:40
5F：推 yoknowme:抗體也有分抓N-His跟C-His的 要注意看看 07/10 15:11
6F：推 icome:我們做都是頭尾都有His 比較保險 07/12 14:36
7F：→ Rinehot:你的buffer條件還有蛋白性質也很重要 07/12 15:45