作者championelmo (elmo轩)
看板Biotech
标题[求救] 请问his tag的纯化方法
时间Fri Jul 9 18:12:36 2010
实验室第一次要做enzyme assay
我们手上拿的载体是pET-32系列 又有在改过
之前再做western blot时使用的抗体是有专一性很高的 S-protein kit
有抓到 有显示出band
之後因为要做纯化 为了省钱就选用his tag
以plasmid map来看 我们的目标蛋白是接在s protein後面 但是前面不远处(约差200bp)
就是his tag的序列了 应该也是抓得到目标蛋白
但是现在通column的结果 量很少 跑胶有band 但有其他的杂band(不是单一band)
想说提高imidazole的浓度 却又没有band了
想请问有经验的朋友 如果遇到这种情形还有哪些方法我可以去嚐试
不希望非得要换S˙tag (太贵了...)
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.124.250.117
1F：推 liuse:量很少 一样用量取胜 用大量的bacteria诱导产生蛋白 07/09 19:56
2F：→ liuse:来提高浓度 让Ni-resin beads尽量saturate 07/09 19:57
3F：推 aggaci:若是确定有6H...那没抓到原因应该是被挡住..... 07/09 22:32
4F：推 asolitary:把his-taq从N端移到C端试试看吧 07/09 22:40
5F：推 yoknowme:抗体也有分抓N-His跟C-His的 要注意看看 07/10 15:11
6F：推 icome:我们做都是头尾都有His 比较保险 07/12 14:36
7F：→ Rinehot:你的buffer条件还有蛋白性质也很重要 07/12 15:45