作者hsjrio (hsjrio)
看板Biotech
標題[求救] 抽高分子量 Genomic DNA 的問題
時間Tue Jul 6 20:45:07 2010
我抽得是斑馬魚的genomic DNA
做法是
把魚冰到-20冰箱十分鐘左右
拿出來用剪刀剪成泥狀
直接放入buffer以50度 輕微震盪O/N
buffer:10mM Tris pH8 ,0.5% SDS, 200ug/ml proteinase K
接下來取出萃取
低速離心,用等體積phenol萃取兩次
phenol:chloroform萃取一次
之後加 final濃度200mM的Nacl和兩倍體積100%酒精
輕微翻轉瓶身就會出現絲狀DNA 然後勾出來WASH.....乾燥....回溶
問題來了....同樣做法之前抽得好好的 現在卻怎麼做都怪怪的
我在加100%酒精之後緩慢混合溶液應該由混濁變澄清然後絲狀DNA出現
現在怎麼混從頭到尾都是混濁的DNA也是會出現
但是隨後就會出現一坨膠狀物把DNA包住
很難分離,最多只能盡量把他吸除
想請問各位有可能是我哪一個步驟做錯了嗎
之前有抽成功過的是用WT斑馬魚
而現在我要抽的sample是轉基因斑馬魚
會大量表現螢光蛋白
會不會跟螢光蛋白有關係??
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1F：→ sunorange:我抽鼠尾也會出現一樣的膠狀物 有人知道為什麼嗎 07/07 12:46
2F：→ redtatami:再溶水然後去做酒精沉澱就ok啦 07/10 02:12