作者hsjrio (hsjrio)
看板Biotech
标题[求救] 抽高分子量 Genomic DNA 的问题
时间Tue Jul 6 20:45:07 2010
我抽得是斑马鱼的genomic DNA
做法是
把鱼冰到-20冰箱十分钟左右
拿出来用剪刀剪成泥状
直接放入buffer以50度 轻微震荡O/N
buffer:10mM Tris pH8 ,0.5% SDS, 200ug/ml proteinase K
接下来取出萃取
低速离心,用等体积phenol萃取两次
phenol:chloroform萃取一次
之後加 final浓度200mM的Nacl和两倍体积100%酒精
轻微翻转瓶身就会出现丝状DNA 然後勾出来WASH.....乾燥....回溶
问题来了....同样做法之前抽得好好的 现在却怎麽做都怪怪的
我在加100%酒精之後缓慢混合溶液应该由混浊变澄清然後丝状DNA出现
现在怎麽混从头到尾都是混浊的DNA也是会出现
但是随後就会出现一坨胶状物把DNA包住
很难分离,最多只能尽量把他吸除
想请问各位有可能是我哪一个步骤做错了吗
之前有抽成功过的是用WT斑马鱼
而现在我要抽的sample是转基因斑马鱼
会大量表现萤光蛋白
会不会跟萤光蛋白有关系??
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◆ From: 140.121.171.81
1F：→ sunorange:我抽鼠尾也会出现一样的胶状物 有人知道为什麽吗 07/07 12:46
2F：→ redtatami:再溶水然後去做酒精沉淀就ok啦 07/10 02:12