作者what15 (小蛙)
看板Biotech
標題[討論] urea denature protein會什麼會變褐色？
時間Wed Jun 30 20:50:55 2010
小妹目前實驗是利用E.coli大量表現融合蛋白
所得到的target protein為inclusion body
所以打完sonication是取pellet的部份以denature buffer（8M urea,50mM Tris-HCL,
0.5M NaCl)回溶，結果發現溶液呈現褐色，當然離完心的上清液跟pellet也都是深褐色
(離心條件為13,000rpm 4度C 15min)，想問為什麼會這樣?是因為蛋白質濃度太高嗎?
還是沒有破菌完全?這樣會影響到通column或蛋白質活性嗎?
真的非常困惑....麻煩大家可以幫忙解解惑 謝謝
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◆ From: 220.137.56.87
1F：推 siucong:我是洗了三次pellet後上清液才會變清澈 06/30 22:24
2F：推 spirithorse:我的是淡淡的褐色,8M Urea會不會太高?(6M) 06/30 22:58
3F：→ spirithorse:sonication 要注意不能回溫或過熱喔! 06/30 22:58
4F：推 kingtiger:會不會是pH值的問題,變色通常是protein變性了 06/30 23:22
5F：→ what15:不懂會什麼要洗三次...protein不是在上清液嗎?>< 07/01 13:59
6F：→ what15:我的protein 6M沒辦法溶耶 07/01 14:00
7F：→ turtle24:protein在上清液的話pellet就可以丟了zz 07/01 15:11