作者what15 (小蛙)
看板Biotech
标题[讨论] urea denature protein会什麽会变褐色？
时间Wed Jun 30 20:50:55 2010
小妹目前实验是利用E.coli大量表现融合蛋白
所得到的target protein为inclusion body
所以打完sonication是取pellet的部份以denature buffer（8M urea,50mM Tris-HCL,
0.5M NaCl)回溶，结果发现溶液呈现褐色，当然离完心的上清液跟pellet也都是深褐色
(离心条件为13,000rpm 4度C 15min)，想问为什麽会这样?是因为蛋白质浓度太高吗?
还是没有破菌完全?这样会影响到通column或蛋白质活性吗?
真的非常困惑....麻烦大家可以帮忙解解惑 谢谢
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◆ From: 220.137.56.87
1F：推 siucong:我是洗了三次pellet後上清液才会变清澈 06/30 22:24
2F：推 spirithorse:我的是淡淡的褐色,8M Urea会不会太高?(6M) 06/30 22:58
3F：→ spirithorse:sonication 要注意不能回温或过热喔! 06/30 22:58
4F：推 kingtiger:会不会是pH值的问题,变色通常是protein变性了 06/30 23:22
5F：→ what15:不懂会什麽要洗三次...protein不是在上清液吗?>< 07/01 13:59
6F：→ what15:我的protein 6M没办法溶耶 07/01 14:00
7F：→ turtle24:protein在上清液的话pellet就可以丢了zz 07/01 15:11