作者fightwith (I'm your Debby)
看板Biotech
標題[討論] 做time cross加藥
時間Tue Jun 29 15:52:13 2010
最近在做一連串的加藥動作
dose做完了 於是想做time ceoss
看一下protein的磷酸化 以及量的變化
因為在之前實驗室 是用"倒著加藥"的方式
也就是starvation overnight之後
晚上七點加24小時 隔天早上七點加12小時 中午11點加8小時
一直到晚上七點就統一收cell lysate
但是現在的實驗室是用"正著加藥"的方式
也就是統一早上七點加藥 之後每隔幾個小時收時間點
一直收到隔天早上七點
不知道這兩種加藥方式到底有甚麼不同
因為看起來倒著加藥很方便
不過正著加藥似乎又比較符合做實驗的條件
大家都是怎麼做這樣子的實驗啊???
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.208.44
1F：推 tsubasawolfy:看你實驗目的呀 從細胞數目多寡下去考量 06/29 16:44
2F：→ tsubasawolfy:btw 是time course吧@@? 06/29 16:47
3F：→ fightwith:我不太知道正確的拼字 我只是想知道這兩種加法 06/29 17:31
4F：→ fightwith:有甚麼不同之處而已 06/29 17:32
5F：推 hilarity:如果時間點拉的很長ex.24h 48h 72h 倒著加藥要考慮細胞 06/29 17:48
6F：→ hilarity:一開始seeding的數量 因為48或72h細胞會生長 我聽過有人 06/29 17:49
7F：→ hilarity:是倒著加藥所以後面的時間點會細胞少下一些 不過我自己 06/29 17:50
8F：→ hilarity:都用正著加 時間點一多會比較辛苦罷了@@ 我是覺得時間點 06/29 17:51
9F：→ hilarity:不長的話 細胞變化應該不大.. 06/29 17:52
目前我做的加藥都只到24小時 不過也有想過細胞數目這一點@@
另外 正著加藥不是每個時間點都要帶一CONTROL嗎??
這樣在跑WB的時候不就很難loading @@
※ 編輯: fightwith 來自: 140.120.208.44 (06/29 18:11)
10F：推 pichia:這樣加藥是偷吃步啊~若把這方法寫在PAPER上會接受才神奇 06/29 22:07
11F：→ pichia:細胞密度差異~很多分子表現量都不同了 06/29 22:08
我倒是知道有實驗室用倒著加藥 也有順利發PAPER
12F：推 tsubasawolfy:有人做WB會不定量的嗎? 06/30 07:44
我的意思不是說不定量 是指說每個時間點帶control 跑WB的well不會不夠用嗎?
13F：→ liuse:一起收是最嚴謹的方法 06/30 08:09
所以正著跟倒著都要作看看囉??這的確是最嚴謹的做法
※ 編輯: fightwith 來自: 140.120.208.44 (06/30 10:37)
14F：推 tsubasawolfy:每個時間點要不要帶control看你實驗目的而定 06/30 11:05
15F：→ tsubasawolfy:well不夠就多做幾片膠又不會死人 06/30 11:05
16F：→ Danielle:不能倒著加啦, 你的時間點看起來沒有很變態阿 06/30 17:47
17F：→ Danielle:我收0,8,12,16,20,24,32都一起加 痛苦幾天就好了 06/30 17:48