作者fightwith (I'm your Debby)
看板Biotech
标题[讨论] 做time cross加药
时间Tue Jun 29 15:52:13 2010
最近在做一连串的加药动作
dose做完了 於是想做time ceoss
看一下protein的磷酸化 以及量的变化
因为在之前实验室 是用"倒着加药"的方式
也就是starvation overnight之後
晚上七点加24小时 隔天早上七点加12小时 中午11点加8小时
一直到晚上七点就统一收cell lysate
但是现在的实验室是用"正着加药"的方式
也就是统一早上七点加药 之後每隔几个小时收时间点
一直收到隔天早上七点
不知道这两种加药方式到底有甚麽不同
因为看起来倒着加药很方便
不过正着加药似乎又比较符合做实验的条件
大家都是怎麽做这样子的实验啊???
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.208.44
1F：推 tsubasawolfy:看你实验目的呀 从细胞数目多寡下去考量 06/29 16:44
2F：→ tsubasawolfy:btw 是time course吧@@? 06/29 16:47
3F：→ fightwith:我不太知道正确的拼字 我只是想知道这两种加法 06/29 17:31
4F：→ fightwith:有甚麽不同之处而已 06/29 17:32
5F：推 hilarity:如果时间点拉的很长ex.24h 48h 72h 倒着加药要考虑细胞 06/29 17:48
6F：→ hilarity:一开始seeding的数量 因为48或72h细胞会生长 我听过有人 06/29 17:49
7F：→ hilarity:是倒着加药所以後面的时间点会细胞少下一些 不过我自己 06/29 17:50
8F：→ hilarity:都用正着加 时间点一多会比较辛苦罢了@@ 我是觉得时间点 06/29 17:51
9F：→ hilarity:不长的话 细胞变化应该不大.. 06/29 17:52
目前我做的加药都只到24小时 不过也有想过细胞数目这一点@@
另外 正着加药不是每个时间点都要带一CONTROL吗??
这样在跑WB的时候不就很难loading @@
※ 编辑: fightwith 来自: 140.120.208.44 (06/29 18:11)
10F：推 pichia:这样加药是偷吃步啊~若把这方法写在PAPER上会接受才神奇 06/29 22:07
11F：→ pichia:细胞密度差异~很多分子表现量都不同了 06/29 22:08
我倒是知道有实验室用倒着加药 也有顺利发PAPER
12F：推 tsubasawolfy:有人做WB会不定量的吗? 06/30 07:44
我的意思不是说不定量 是指说每个时间点带control 跑WB的well不会不够用吗?
13F：→ liuse:一起收是最严谨的方法 06/30 08:09
所以正着跟倒着都要作看看罗??这的确是最严谨的做法
※ 编辑: fightwith 来自: 140.120.208.44 (06/30 10:37)
14F：推 tsubasawolfy:每个时间点要不要带control看你实验目的而定 06/30 11:05
15F：→ tsubasawolfy:well不够就多做几片胶又不会死人 06/30 11:05
16F：→ Danielle:不能倒着加啦, 你的时间点看起来没有很变态阿 06/30 17:47
17F：→ Danielle:我收0,8,12,16,20,24,32都一起加 痛苦几天就好了 06/30 17:48