作者liquidwater (飛得越高是給越多人看)
看板Biotech
標題[討論] in vitro kinase assay
時間Wed Jun 23 17:42:38 2010
我把A蛋白的DNA序列接上pcDNA3.1(-), 再transfect進入細胞去大量表達
A蛋白.現做過A蛋白的IP, 可與B kinase結合.
現在想要利用in vitro kinase assay的方法去看A蛋白是否能影響B kinase的活性.
各位知道有什麼方式可以不用放射性的方法來測試嗎
細胞內生性的B kinase會因為太少, 而偵測不到嗎
如果再加上抗體與A蛋白的專一性不夠好的話, 實驗應該很難成功吧
有人做過類似的實驗嗎 煩請賜教
謝謝
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◆ From: 211.76.175.171
1F：推 aggaci:看kinase下游阿...看他的substrate..比如說看GSK3beta常常 06/23 17:57
2F：→ aggaci:就是看beta-catenin的量 06/23 17:57
3F：推 tsubasawolfy:in vitro跟你倒數三四行無關吧 06/23 18:05
4F：→ liquidwater:那MEKK3呢 p38嗎 06/23 19:38
5F：推 celestial318:試試看phospho-p38 06/23 23:11
6F：→ mtdas:若沒有phospho-specific antibody 就只能用gamma-32P ATP了 06/24 02:59
7F：→ humwang:可以用該kinase的substrate來做，再用p-substrate 的抗體 06/29 20:03
8F：→ humwang:不需要用到放射線同位素 06/29 20:05