作者liquidwater (飞得越高是给越多人看)
看板Biotech
标题[讨论] in vitro kinase assay
时间Wed Jun 23 17:42:38 2010
我把A蛋白的DNA序列接上pcDNA3.1(-), 再transfect进入细胞去大量表达
A蛋白.现做过A蛋白的IP, 可与B kinase结合.
现在想要利用in vitro kinase assay的方法去看A蛋白是否能影响B kinase的活性.
各位知道有什麽方式可以不用放射性的方法来测试吗
细胞内生性的B kinase会因为太少, 而侦测不到吗
如果再加上抗体与A蛋白的专一性不够好的话, 实验应该很难成功吧
有人做过类似的实验吗 烦请赐教
谢谢
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◆ From: 211.76.175.171
1F：推 aggaci:看kinase下游阿...看他的substrate..比如说看GSK3beta常常 06/23 17:57
2F：→ aggaci:就是看beta-catenin的量 06/23 17:57
3F：推 tsubasawolfy:in vitro跟你倒数三四行无关吧 06/23 18:05
4F：→ liquidwater:那MEKK3呢 p38吗 06/23 19:38
5F：推 celestial318:试试看phospho-p38 06/23 23:11
6F：→ mtdas:若没有phospho-specific antibody 就只能用gamma-32P ATP了 06/24 02:59
7F：→ humwang:可以用该kinase的substrate来做，再用p-substrate 的抗体 06/29 20:03
8F：→ humwang:不需要用到放射线同位素 06/29 20:05