作者conan11 (民國的福爾摩斯)
看板Biotech
標題Re: [求救] western疑問
時間Thu Jun 17 01:14:32 2010
※ 引述《chung1987 (免費聊天 請進...)》之銘言：
: ※ 引述《chung1987 (免費聊天 請進...)》之銘言：
: 還有一個問題想問問各位
: 既然transfer的時間過久
: 蛋白會跑過頭
: 如果今天我要定量好幾種不同分子量的蛋白
: 在transfer的過程中
: 分子量小的蛋白應該會跑得比大分子量的要快
: 像這樣：
: 側面-->
: | \ |
: | \ |
: | \ |
: | \ |
: | \ |
: SDS膠 蛋白 PVDF
: 想讓大蛋白都跑到膜上，小蛋白就過頭了
: 反之小蛋白都在膜上時，大蛋白還沒transfer完
: 抓transfer時間也沒用，顧此失彼
: 這樣定量就不準了
: 也不確定蛋白的流失是依量還是依比例
: 有將所有蛋白留在膜上的方法嗎?
在下也有個問題想請教
為什麼跑膠的時候我們固定的是電壓(伏特)
而轉印的時後卻是固定電流(安培)
雖然是目的不同沒錯 但是到底是因為什麼而需要分別固定電流或電壓
可能問的有點模糊 先謝謝板友的解答了
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◆ From: 58.114.81.132
1F：→ puec2:跑電泳也可以固定電流 06/17 01:29
2F：→ puec2:transfer我都是固定電壓 06/17 01:29
3F：→ puec2:所以...沒有一定.. 不要把實驗室燒掉就好了。 06/17 01:30
4F：→ turtle24:我跑膠是固定電流 轉印固定電壓 06/17 01:48
5F：推 kg9101266:同樓上 跑膠上0.03A 下0.06A 轉印電壓15V(2片) 06/17 01:56
6F：推 a001ou:跑膠定電流在跑到最後的時候會因為電阻增加有太熱的可能 06/17 04:52
7F：推 yohko86:跑膠-->固定電壓(80/130/150 V) 轉漬-->固定電流(100mA*N 06/17 09:56
8F：→ mobisrat:跑膠固定電壓和固定電流差不多一樣 因為電阻不太變動 06/17 12:07
9F：→ mobisrat:轉漬固定電流則轉漬速率不變 固定電壓則轉漬速率逐漸變慢 06/17 12:07
10F：推 loham:電阻跟溫度有關,溫度升高電阻變小,V=IR 06/17 12:58
11F：→ loham:所以要看系統,有些牌子的機器散熱沒那麼好,或是實驗室沒習慣 06/17 12:59
12F：→ loham:降溫,此外溫度也會影響pH值 06/17 13:03
13F：推 a001ou:溫度太高膠會有變形的甚至溶掉的可能 然後band就歪七扭八了 06/17 17:10
14F：推 leoblack:這沒有一定,像我就跑膠=定電流,轉印=定電壓(semi-dry) 06/17 22:47
15F：→ conan11:謝謝各位的意見交流 小弟得到很多 06/19 23:32