作者chung1987 (免費聊天 請進...)
看板Biotech
標題Re: [求救] western疑問
時間Thu Jun 17 01:01:04 2010
※ 引述《chung1987 (免費聊天 請進...)》之銘言：
: western在transfer的時候
: 會不會因為transfer的時間太久
: 而讓蛋白從膜的另一邊跑掉呢?
: 還是蛋白轉到膜上便停住了?
: 因為之前照相的時候
: 好奇把膜翻面再拍
: 發現band也滿清楚的
: 不曉得是不是蛋白跑到背面來了
還有一個問題想問問各位
既然transfer的時間過久
蛋白會跑過頭
如果今天我要定量好幾種不同分子量的蛋白
在transfer的過程中
分子量小的蛋白應該會跑得比大分子量的要快
像這樣：
側面-->
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| \ |
| \ |
SDS膠 蛋白 PVDF
想讓大蛋白都跑到膜上，小蛋白就過頭了
反之小蛋白都在膜上時，大蛋白還沒transfer完
抓transfer時間也沒用，顧此失彼
這樣定量就不準了
也不確定蛋白的流失是依量還是依比例
有將所有蛋白留在膜上的方法嗎?
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◆ From: 140.112.218.157
1F：推 pichia:用孔徑小一點的PVDF~但是相對容易卡一些抗體~所以要洗久 06/17 01:15
2F：→ ordinary07:你定量是定相同蛋白 相同蛋白轉過去的比率理論上相同 06/17 08:44
3F：→ ordinary07:況且 也不可能真的把蛋白都轉到膜上 你染膠就知道 06/17 08:46
4F：→ ordinary07:低電壓 o/n 應該是最好的方法了吧 06/17 08:53
5F：→ ordinary07:低安培... 06/17 08:54
6F：推 a491332018:這個沒辦法很準啦 都是看比較值 06/17 08:59
7F：→ chung1987:感謝各位的意見，對我幫助很大 06/18 21:46