作者chung1987 (免费聊天 请进...)
看板Biotech
标题Re: [求救] western疑问
时间Thu Jun 17 01:01:04 2010
※ 引述《chung1987 (免费聊天 请进...)》之铭言：
: western在transfer的时候
: 会不会因为transfer的时间太久
: 而让蛋白从膜的另一边跑掉呢?
: 还是蛋白转到膜上便停住了?
: 因为之前照相的时候
: 好奇把膜翻面再拍
: 发现band也满清楚的
: 不晓得是不是蛋白跑到背面来了
还有一个问题想问问各位
既然transfer的时间过久
蛋白会跑过头
如果今天我要定量好几种不同分子量的蛋白
在transfer的过程中
分子量小的蛋白应该会跑得比大分子量的要快
像这样：
侧面-->
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| \ |
SDS胶 蛋白 PVDF
想让大蛋白都跑到膜上，小蛋白就过头了
反之小蛋白都在膜上时，大蛋白还没transfer完
抓transfer时间也没用，顾此失彼
这样定量就不准了
也不确定蛋白的流失是依量还是依比例
有将所有蛋白留在膜上的方法吗?
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◆ From: 140.112.218.157
1F：推 pichia:用孔径小一点的PVDF~但是相对容易卡一些抗体~所以要洗久 06/17 01:15
2F：→ ordinary07:你定量是定相同蛋白 相同蛋白转过去的比率理论上相同 06/17 08:44
3F：→ ordinary07:况且 也不可能真的把蛋白都转到膜上 你染胶就知道 06/17 08:46
4F：→ ordinary07:低电压 o/n 应该是最好的方法了吧 06/17 08:53
5F：→ ordinary07:低安培... 06/17 08:54
6F：推 a491332018:这个没办法很准啦 都是看比较值 06/17 08:59
7F：→ chung1987:感谢各位的意见，对我帮助很大 06/18 21:46