作者foxbat (霜夜焰蝠)
看板Biotech
標題[求救] 請問有用SYBR SAFE染劑的高手
時間Tue Jun 15 23:17:42 2010
小弟在使用SYBR SAFE染劑時遭遇幾個大問題
材料是LE agarose內染，每100mL加1uL染劑
PCR總反應體積10uL
plant genomic DNA 50ng
鎂離子濃度2.5mM
dNTP濃度0.3mM
酵素是用taq
首先是背景值過亮的問題一直無法改善
雖然條帶看得見但後面一把油漆刷亮帶就是會讓整個照片不太好看
是不影響判讀但老闆希望能投稿要有漂亮照片...
另外我發現若是電泳時間較長
染劑似乎會有往負極跑的現象
造成膠片上方亮、下方暗的情形
再者SYBR SAFE染的條帶亮度好像跟EtBr比起來就是差了點
雖說實驗室的系統是直接沿用UV燈+EtBr濾鏡
不是SYBR SAFE最大激發波長但302nm也是另一個激發波峰只是比較小一點
在無法更換照相系統的狀況下
有沒有什麼方法可以讓染色效果更好的??
或是有什麼其他安全染劑是也可以換著試試看的??
小弟就是不想再用EtBr才會想要以安全染劑來替換
有請板上眾實驗高手們救援
感謝!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 122.126.141.236
1F：→ foxbat:忘了說primer濃度是0.3uM 是會擴增產生多條帶的ISSR引子 06/15 23:22
2F：→ ordinary07:用 imageJ 分分看 把可以把全彩 分成三原色 06/16 00:30
3F：→ ordinary07:image>color>split channel 06/16 00:32
4F：推 ordinary07:不過如果你存的是黑白照片就不用分了... 06/16 00:34
5F：推 soom:不知道貴實驗室的照相系統能不能調光圈跟曝光時間 06/16 01:05
6F：→ soom:能的話也可以試看看縮光圈拉長時間 06/16 01:05
7F：推 Fourfish:內染方便但大多都會上亮下暗的 要圖漂亮就外染吧！ 06/16 18:40
8F：→ Fourfish:不然跑完電泳 把膠泡在水或buffer一陣子也可改善背景過亮 06/16 18:41