作者foxbat (霜夜焰蝠)
看板Biotech
标题[求救] 请问有用SYBR SAFE染剂的高手
时间Tue Jun 15 23:17:42 2010
小弟在使用SYBR SAFE染剂时遭遇几个大问题
材料是LE agarose内染，每100mL加1uL染剂
PCR总反应体积10uL
plant genomic DNA 50ng
镁离子浓度2.5mM
dNTP浓度0.3mM
酵素是用taq
首先是背景值过亮的问题一直无法改善
虽然条带看得见但後面一把油漆刷亮带就是会让整个照片不太好看
是不影响判读但老板希望能投稿要有漂亮照片...
另外我发现若是电泳时间较长
染剂似乎会有往负极跑的现象
造成胶片上方亮、下方暗的情形
再者SYBR SAFE染的条带亮度好像跟EtBr比起来就是差了点
虽说实验室的系统是直接沿用UV灯+EtBr滤镜
不是SYBR SAFE最大激发波长但302nm也是另一个激发波峰只是比较小一点
在无法更换照相系统的状况下
有没有什麽方法可以让染色效果更好的??
或是有什麽其他安全染剂是也可以换着试试看的??
小弟就是不想再用EtBr才会想要以安全染剂来替换
有请板上众实验高手们救援
感谢!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 122.126.141.236
1F：→ foxbat:忘了说primer浓度是0.3uM 是会扩增产生多条带的ISSR引子 06/15 23:22
2F：→ ordinary07:用 imageJ 分分看 把可以把全彩 分成三原色 06/16 00:30
3F：→ ordinary07:image>color>split channel 06/16 00:32
4F：推 ordinary07:不过如果你存的是黑白照片就不用分了... 06/16 00:34
5F：推 soom:不知道贵实验室的照相系统能不能调光圈跟曝光时间 06/16 01:05
6F：→ soom:能的话也可以试看看缩光圈拉长时间 06/16 01:05
7F：推 Fourfish:内染方便但大多都会上亮下暗的 要图漂亮就外染吧！ 06/16 18:40
8F：→ Fourfish:不然跑完电泳 把胶泡在水或buffer一阵子也可改善背景过亮 06/16 18:41