: 最近在做IL-31的ELISA : sampel是human serum : 使用的是廠商coating好的kit : 只需要自行加入二抗及呈色劑 : 做了兩盤(96well)後 : standard curve都能達到0.99以上 : sample測出來的OD卻都很低(約<0.3) : 所以濃度算出來都是負值 : 第一盤做完以後 : 我有詢問廠商是否有人跟我情況一樣 : 有甚麼解決的方法 : 原廠答覆是 : 可以嘗試將抗體dilute的溶劑 : 由無菌水換成含1%BAS的PBS : 結果第二盤整個OD range壓縮 : 但是sample變的很濃 : 問題還是沒解決... : 想請問做過此組或是類似kit的前輩 : 有沒有甚麼好方法? : PS:OD以450nm偵測 我想這就是典型的以期望結果做結論而不是以實驗結果做結論!!! 我有遇過你這種情形, U937細胞上清液測 IL6 TNFa IL1B 我是用pierce coat好的kit 情況跟你一樣standard curve狠準0.99或1，但是sample的吸光值或濃度變動很大 唯一比較一樣的是推算濃度都是負值。 一開始老闆和我以為是我實驗操作的問題,但最後找出以前人做出的microarray data 和我的ELISA比對才發現，我對U937作的處理根本不會造成他分泌上述3種發炎因子 array data和我ELISA data相呼印 就我來看你的敘述 1.要相信自己的DATA 從你敘述standard curve狠準就應該排除kit 瑕疵或人為操作不當，standard除了當作 濃度推算外還是一種internal control 2.如果測出來是濃度負值應該要考慮是否不會分泌這種因子 數字變動大或是值會跳動是因為分泌不足以測得，或值實在太低超過機器或kit的 limitation -- ◤ ╭● 叫我鬍子就好了 ＿(▁)▁ ◤龍▃▄▅▄ 我會很有禮貌的 ( ﹎﹎ ) § ● ● ╯ ＝ ＝ │ ◣ ︶ ◣─ ◢ ─ ◥◤) ψmroscar ╰斗╯ ◢ | | 三明書局-你所不知道的關二哥 ◥ --

※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.42.222.167 ※ 編輯: takumatw 來自: 114.42.209.29 (06/13 13:18)