: 最近在做IL-31的ELISA : sampel是human serum : 使用的是厂商coating好的kit : 只需要自行加入二抗及呈色剂 : 做了两盘(96well)後 : standard curve都能达到0.99以上 : sample测出来的OD却都很低(约<0.3) : 所以浓度算出来都是负值 : 第一盘做完以後 : 我有询问厂商是否有人跟我情况一样 : 有甚麽解决的方法 : 原厂答覆是 : 可以尝试将抗体dilute的溶剂 : 由无菌水换成含1%BAS的PBS : 结果第二盘整个OD range压缩 : 但是sample变的很浓 : 问题还是没解决... : 想请问做过此组或是类似kit的前辈 : 有没有甚麽好方法? : PS:OD以450nm侦测 我想这就是典型的以期望结果做结论而不是以实验结果做结论!!! 我有遇过你这种情形, U937细胞上清液测 IL6 TNFa IL1B 我是用pierce coat好的kit 情况跟你一样standard curve狠准0.99或1，但是sample的吸光值或浓度变动很大 唯一比较一样的是推算浓度都是负值。 一开始老板和我以为是我实验操作的问题,但最後找出以前人做出的microarray data 和我的ELISA比对才发现，我对U937作的处理根本不会造成他分泌上述3种发炎因子 array data和我ELISA data相呼印 就我来看你的叙述 1.要相信自己的DATA 从你叙述standard curve狠准就应该排除kit 瑕疵或人为操作不当，standard除了当作 浓度推算外还是一种internal control 2.如果测出来是浓度负值应该要考虑是否不会分泌这种因子 数字变动大或是值会跳动是因为分泌不足以测得，或值实在太低超过机器或kit的 limitation -- ◤ ╭● 叫我胡子就好了 ＿(▁)▁ ◤龙▃▄▅▄ 我会很有礼貌的 ( ﹎﹎ ) § ● ● ╯ ＝ ＝ │ ◣ ︶ ◣─ ◢ ─ ◥◤) ψmroscar ╰斗╯ ◢ | | 三明书局-你所不知道的关二哥 ◥ --

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