作者Fourfish (～四條魚～)
看板Biotech
標題Re: [求救] 重組蛋白低溫保存條件
時間Thu Jun 10 12:34:38 2010
請問你要冰幾度？
保存用20%蠻常見的 怕被凍壞可以提高到50%
我只能說 自己試試看吧...
然後...不好意思 藉這篇想跳出來分享一下
最近在此板看到很多人在問
"我現在在表現蛋白 請問用幾度C 多少IPTG 什麼菌能得到比較多?"
"最近在純化蛋白 要用什麼buffer、濃度、pH值比較好？"
"純化出來的蛋白 怎麼保存？能保存多久？該冰在幾度？"
很高興做蛋白研究的似乎越來越多
因為自身也是在蛋白質實驗室學習的小咖 看起來蛋白質很有前景XD
但每當看到這類問題出現都覺得很無奈...（對我都快變月經題了...實驗室加同學再問..）
因為每個人做的蛋白質不一樣就是不一樣
不像DNA or RNA說在TE或特定buffer裡面比較穩定 大家的保存就都能用同一套
蛋白質神奇之處就是每個都有自己的特性
不同的pI 不同大小 不同組成 不同活性...
要怎麼能說某一種條件對所有的蛋白保存、純化或反應都是好的？
有 有聽說 Tris+EDTA+Glycerol 是個很多蛋白都喜歡的buffer
但也很多不喜歡
例如說 很多酵素都需要cofactor buffer中多了EDTA就沒辦法作用
有的對溫度很敏感 溫度一高就降解或沈澱
甚至有的很強壯 隨便丟在室溫七天七夜 泡在冰筒裡游泳都沒差
所以我只想跟踏入蛋白質領域的夥伴們說
"條件就是要去試了才知道 不然怎麼叫做[實驗]？？"
如果現在有一套protocol或condition大家都試用
那今天蛋白質研究的進展已經飛到太空去了吧...
建議如果想了解什麼條件對自己的蛋白可能比較好
先去查文獻 什麼蛋白跟你的最像 條件是什麼 去試試 試了就知道
想徵詢其他夥伴們的意見 也該把自己蛋白的特性、活性是什麼描述一下...
不然每個人把自己實驗經驗說出來 一大堆 還不是一樣沒有頭緒？可能還更混亂吧...
再不然
最根本 對所有蛋白質都最好的方法就是：純化出來趕快用掉就對了！
希望大家實驗順利
※ 引述《lookfor0326 (find)》之銘言：
: 大家好~
: 我從Ecoli中得到我要的重組蛋白，也純化好了
: 但遇到一個問題就是關於它的保存條件
: 我查到有人會把重組蛋白用甘油保存在低溫環境下
: 只是
: 我看到有些人是用20%甘油
: 也有15% 也有10%
: 這些濃度都OK嗎???
: 好多條件喔
: 是哪一個呢?
: 謝謝大家
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.94.157
1F：推 kingtiger:我想原po應該是想凍到-80吧,如果是-30其實可以不用加 06/10 14:10
2F：推 cloudcc:推一個! 06/10 16:20
3F：推 missal:我倒覺得可以把這個當成經驗分享 很多條件在沒接觸過之前 06/10 18:08
4F：→ missal:很多人或許不知道根本有這種option 06/10 18:10
5F：→ missal:這樣討論交流大家都可以學到更多 不是嗎? :) 06/10 18:11
6F：推 celestial318:只是想聽聽別人的方法吧 多參考總是好的 06/10 20:18
7F：推 dodomilk:只能推了 06/10 20:37
8F：→ Fourfish:是的 我同意樓上幾樓 我也從交流中向大家學到很多 06/10 20:46
9F：→ Fourfish:只是建議當問題提出時 可以多描述一些自己的狀況 也能讓 06/10 20:48
10F：→ Fourfish:意見的交流能更加明確有效~ :) 06/10 20:49
11F：推 littlelizard:推新鮮生產新鮮用 雖然很累可是 data 品質最好 :) 06/13 21:00