作者Fourfish (～四条鱼～)
看板Biotech
标题Re: [求救] 重组蛋白低温保存条件
时间Thu Jun 10 12:34:38 2010
请问你要冰几度？
保存用20%蛮常见的 怕被冻坏可以提高到50%
我只能说 自己试试看吧...
然後...不好意思 藉这篇想跳出来分享一下
最近在此板看到很多人在问
"我现在在表现蛋白 请问用几度C 多少IPTG 什麽菌能得到比较多?"
"最近在纯化蛋白 要用什麽buffer、浓度、pH值比较好？"
"纯化出来的蛋白 怎麽保存？能保存多久？该冰在几度？"
很高兴做蛋白研究的似乎越来越多
因为自身也是在蛋白质实验室学习的小咖 看起来蛋白质很有前景XD
但每当看到这类问题出现都觉得很无奈...（对我都快变月经题了...实验室加同学再问..）
因为每个人做的蛋白质不一样就是不一样
不像DNA or RNA说在TE或特定buffer里面比较稳定 大家的保存就都能用同一套
蛋白质神奇之处就是每个都有自己的特性
不同的pI 不同大小 不同组成 不同活性...
要怎麽能说某一种条件对所有的蛋白保存、纯化或反应都是好的？
有 有听说 Tris+EDTA+Glycerol 是个很多蛋白都喜欢的buffer
但也很多不喜欢
例如说 很多酵素都需要cofactor buffer中多了EDTA就没办法作用
有的对温度很敏感 温度一高就降解或沈淀
甚至有的很强壮 随便丢在室温七天七夜 泡在冰筒里游泳都没差
所以我只想跟踏入蛋白质领域的夥伴们说
"条件就是要去试了才知道 不然怎麽叫做[实验]？？"
如果现在有一套protocol或condition大家都试用
那今天蛋白质研究的进展已经飞到太空去了吧...
建议如果想了解什麽条件对自己的蛋白可能比较好
先去查文献 什麽蛋白跟你的最像 条件是什麽 去试试 试了就知道
想徵询其他夥伴们的意见 也该把自己蛋白的特性、活性是什麽描述一下...
不然每个人把自己实验经验说出来 一大堆 还不是一样没有头绪？可能还更混乱吧...
再不然
最根本 对所有蛋白质都最好的方法就是：纯化出来赶快用掉就对了！
希望大家实验顺利
※ 引述《lookfor0326 (find)》之铭言：
: 大家好~
: 我从Ecoli中得到我要的重组蛋白，也纯化好了
: 但遇到一个问题就是关於它的保存条件
: 我查到有人会把重组蛋白用甘油保存在低温环境下
: 只是
: 我看到有些人是用20%甘油
: 也有15% 也有10%
: 这些浓度都OK吗???
: 好多条件喔
: 是哪一个呢?
: 谢谢大家
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.94.157
1F：推 kingtiger:我想原po应该是想冻到-80吧,如果是-30其实可以不用加 06/10 14:10
2F：推 cloudcc:推一个! 06/10 16:20
3F：推 missal:我倒觉得可以把这个当成经验分享 很多条件在没接触过之前 06/10 18:08
4F：→ missal:很多人或许不知道根本有这种option 06/10 18:10
5F：→ missal:这样讨论交流大家都可以学到更多 不是吗? :) 06/10 18:11
6F：推 celestial318:只是想听听别人的方法吧 多参考总是好的 06/10 20:18
7F：推 dodomilk:只能推了 06/10 20:37
8F：→ Fourfish:是的 我同意楼上几楼 我也从交流中向大家学到很多 06/10 20:46
9F：→ Fourfish:只是建议当问题提出时 可以多描述一些自己的状况 也能让 06/10 20:48
10F：→ Fourfish:意见的交流能更加明确有效~ :) 06/10 20:49
11F：推 littlelizard:推新鲜生产新鲜用 虽然很累可是 data 品质最好 :) 06/13 21:00