作者mattmatt (乎哩乎哩 N N )
看板Biotech
標題[求救] 不會破的透析膜=.=
時間Fri Jun 4 17:32:39 2010
版友們有沒有推薦哪家廠牌的透析膜阿?
我們家用orange scientific的35k MW透析膜
用80%硫酸銨沉澱完要過Ni-NTA agarose
所以把protein用lysis buffer回溶並且對lysis buf.透析1L x 3 times
但已經發生好幾次破洞了(裂開一條縫,protein跑光光)
即將被透析膜逼瘋
搞不懂是我手殘還是protein特性?
還是透析膜有問題?
有其他人有類似的經驗嗎?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.80.100
1F：推 leoblack:抽的時候太暴力了?! 06/04 17:49
2F：→ mattmatt:樓上是說抽?...哪個步驟? 06/04 17:51
3F：推 sheepfeather:我用同廠牌 10K的很OK阿 還可以回收用三次 XD 06/04 18:10
4F：→ lovesteve:pierce的snakeskin不錯喔~ 06/04 20:59
5F：推 Chuppx:很多透析膜的材質是cellulose 如果你的protein是cellulase 06/04 21:14
6F：→ Chuppx:就有可能把透析膜digest 我之前是這樣… 06/04 21:15
7F：→ mattmatt:樓上利害...我的酵素的確是跟細胞壁分解有關的... 06/04 21:38
8F：→ mattmatt:但不確定他有沒有cellulase的活性...我check一下透膜成分 06/04 21:39
9F：→ mattmatt:另外想問有沒有可能因為高濃縮的protein 在透析時進入 06/04 21:41
10F：→ mattmatt:太多水分 使膜被撐破的可能? 每次透析完膜都都很脹說... 06/04 21:42
11F：→ turtle24:stir太快被轉破也是有發生過=w= 06/05 00:22
12F：→ mattmatt:我轉速都給他開到不會有漩渦...速度應該是頗慢.. 06/05 01:34
13F：推 Chuppx:把透析膜撐破是不太可能 因為濃度會達到動態平衡 06/05 17:35
14F：→ Chuppx:看來真的是你的protein的特性問題 細胞壁的成分也是 06/05 17:37
15F：→ Chuppx:cellulose 我覺得你可以試著在低溫的環境下透析 降低你的 06/05 17:38
16F：→ Chuppx:protein活性 透析膜比較不會被digest 06/05 17:39
17F：→ mattmatt:感謝chuppx大 我的蛋白是木質分解酵素 對不同於cellulose 06/06 14:47
18F：→ mattmatt:的醣類鍵結做水解...看來他也是有cellulase活性..@@ 06/06 14:48
19F：→ mattmatt:我都在4度c做透析..per 1L buf./6hr 共3次18hr.. 06/06 14:49
20F：→ mattmatt:換第二次或第三次就有破洞..看來低溫還是無法抑制活性 06/06 14:51
21F：→ mattmatt:但我真沒注意到透析膜成分...看來得換別種材質了>< 06/06 14:51