作者mattmatt (乎哩乎哩 N N )
看板Biotech
标题[求救] 不会破的透析膜=.=
时间Fri Jun 4 17:32:39 2010
版友们有没有推荐哪家厂牌的透析膜阿?
我们家用orange scientific的35k MW透析膜
用80%硫酸铵沉淀完要过Ni-NTA agarose
所以把protein用lysis buffer回溶并且对lysis buf.透析1L x 3 times
但已经发生好几次破洞了(裂开一条缝,protein跑光光)
即将被透析膜逼疯
搞不懂是我手残还是protein特性?
还是透析膜有问题?
有其他人有类似的经验吗?
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.80.100
1F：推 leoblack:抽的时候太暴力了?! 06/04 17:49
2F：→ mattmatt:楼上是说抽?...哪个步骤? 06/04 17:51
3F：推 sheepfeather:我用同厂牌 10K的很OK阿 还可以回收用三次 XD 06/04 18:10
4F：→ lovesteve:pierce的snakeskin不错喔~ 06/04 20:59
5F：推 Chuppx:很多透析膜的材质是cellulose 如果你的protein是cellulase 06/04 21:14
6F：→ Chuppx:就有可能把透析膜digest 我之前是这样… 06/04 21:15
7F：→ mattmatt:楼上利害...我的酵素的确是跟细胞壁分解有关的... 06/04 21:38
8F：→ mattmatt:但不确定他有没有cellulase的活性...我check一下透膜成分 06/04 21:39
9F：→ mattmatt:另外想问有没有可能因为高浓缩的protein 在透析时进入 06/04 21:41
10F：→ mattmatt:太多水分 使膜被撑破的可能? 每次透析完膜都都很胀说... 06/04 21:42
11F：→ turtle24:stir太快被转破也是有发生过=w= 06/05 00:22
12F：→ mattmatt:我转速都给他开到不会有漩涡...速度应该是颇慢.. 06/05 01:34
13F：推 Chuppx:把透析膜撑破是不太可能 因为浓度会达到动态平衡 06/05 17:35
14F：→ Chuppx:看来真的是你的protein的特性问题 细胞壁的成分也是 06/05 17:37
15F：→ Chuppx:cellulose 我觉得你可以试着在低温的环境下透析 降低你的 06/05 17:38
16F：→ Chuppx:protein活性 透析膜比较不会被digest 06/05 17:39
17F：→ mattmatt:感谢chuppx大 我的蛋白是木质分解酵素 对不同於cellulose 06/06 14:47
18F：→ mattmatt:的醣类键结做水解...看来他也是有cellulase活性..@@ 06/06 14:48
19F：→ mattmatt:我都在4度c做透析..per 1L buf./6hr 共3次18hr.. 06/06 14:49
20F：→ mattmatt:换第二次或第三次就有破洞..看来低温还是无法抑制活性 06/06 14:51
21F：→ mattmatt:但我真没注意到透析膜成分...看来得换别种材质了>< 06/06 14:51