作者dodomilk (豆漿)
看板Biotech
標題[求救] competent cell製作
時間Thu Jun 3 15:46:11 2010
我們實驗室想作的是一種叫XL10-gold的E.coli, strategene的產品
因為有TetR基因, 所以我在養菌時加了Tet 20ug/ml
不過作出來的菌居然可以在有Amp的LB plate上長滿滿的...不是一顆顆, 是一整片
是不是有污染呢？
或者是有Tet抗性的菌會影響對Amp的抗性？(應該不會吧...)
大概說一下我的作的過程
從-80度冰箱挖一些XL10-gold, 種到含20 ug/ml Tet, 50 ml LB的錐形瓶, 37度隔夜
取200 ul culture, refresh到另一個含20 ug/ml Tet, 50 ml LB的錐形瓶
OD = 0.35的時候冰浴10 mins, 4000 rpm 轉 10 mins, 倒掉上清液
在冰上用12 ml過濾過的氯化鈣溶液(包含一些其他鹽類及甘油)resuspend
冰浴10 mins, 4000 rpm 轉 10 mins, 倒掉上清液
在冰上用4 ml氯化鈣溶液resuspend, 分裝, 每100 ul一管
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.44.46
1F：推 tsubasawolfy:他本身不會抗Amp... 06/03 16:11
2F：→ tsubasawolfy:不然他附的pUC18 control不就附心酸的.. 06/03 16:12
3F：推 bigcat24:做過XL-Blue 本身不會抗Amp 看來是貴lab的stock 有問題~ 06/03 16:35
4F：推 snowypuppy:之前做competent cell有污染的時候也是長一整片怪東西 06/03 19:20
5F：→ snowypuppy:如果用stock去塗盤看看有沒有污染呢? 06/03 19:20
6F：→ snowypuppy:不然就重做一次吧～可能是做的過程中有污染問題 06/03 19:21
7F：推 CakeCola:XL-10 gold可以自己做喔? 之前買一管1000多，超貴! 06/03 22:33
8F：推 snowypuppy:competent cell都可以自己做呀～只是效率沒有買的好啦 06/03 22:58
9F：→ chaunen:我都一次做2個紙盒說, Amp 20/ug/ml 不會有點少嗎@@? 06/03 23:35
10F：→ chaunen:我是用50~100ug/ml 06/03 23:36
11F：→ chaunen:這菌會長得比較快, 時間比DH5a少大概2hr吧 06/03 23:36
12F：推 chaunen:我說XL-10 gold 06/03 23:59
13F：→ chaunen:抱歉 我會錯意了 06/04 00:00
14F：推 aeroufo:你塗盤有沒有塗乾壓，會不會是因為你的菌根本沒有乾也會長 06/04 12:45
15F：→ aeroufo:成整盤都是菌，而不是一顆顆的菌，如果是一顆顆的那汙染了 06/04 12:46
16F：→ aeroufo:就重新由頭開始試吧 06/04 12:47
17F：推 jennychine:Ap很容易就會失效的~建議重配 加上plate也要50ug/ml 06/04 14:10
抱歉，後來再測試一次之後，認為應該是我把有作pUC18(含ampR) transformation
和沒作的搞混了...搞笑了，對不起...
※ 編輯: dodomilk 來自: 123.195.13.126 (06/04 19:11)