作者dodomilk (豆浆)
看板Biotech
标题[求救] competent cell制作
时间Thu Jun 3 15:46:11 2010
我们实验室想作的是一种叫XL10-gold的E.coli, strategene的产品
因为有TetR基因, 所以我在养菌时加了Tet 20ug/ml
不过作出来的菌居然可以在有Amp的LB plate上长满满的...不是一颗颗, 是一整片
是不是有污染呢？
或者是有Tet抗性的菌会影响对Amp的抗性？(应该不会吧...)
大概说一下我的作的过程
从-80度冰箱挖一些XL10-gold, 种到含20 ug/ml Tet, 50 ml LB的锥形瓶, 37度隔夜
取200 ul culture, refresh到另一个含20 ug/ml Tet, 50 ml LB的锥形瓶
OD = 0.35的时候冰浴10 mins, 4000 rpm 转 10 mins, 倒掉上清液
在冰上用12 ml过滤过的氯化钙溶液(包含一些其他盐类及甘油)resuspend
冰浴10 mins, 4000 rpm 转 10 mins, 倒掉上清液
在冰上用4 ml氯化钙溶液resuspend, 分装, 每100 ul一管
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.44.46
1F：推 tsubasawolfy:他本身不会抗Amp... 06/03 16:11
2F：→ tsubasawolfy:不然他附的pUC18 control不就附心酸的.. 06/03 16:12
3F：推 bigcat24:做过XL-Blue 本身不会抗Amp 看来是贵lab的stock 有问题~ 06/03 16:35
4F：推 snowypuppy:之前做competent cell有污染的时候也是长一整片怪东西 06/03 19:20
5F：→ snowypuppy:如果用stock去涂盘看看有没有污染呢? 06/03 19:20
6F：→ snowypuppy:不然就重做一次吧～可能是做的过程中有污染问题 06/03 19:21
7F：推 CakeCola:XL-10 gold可以自己做喔? 之前买一管1000多，超贵! 06/03 22:33
8F：推 snowypuppy:competent cell都可以自己做呀～只是效率没有买的好啦 06/03 22:58
9F：→ chaunen:我都一次做2个纸盒说, Amp 20/ug/ml 不会有点少吗@@? 06/03 23:35
10F：→ chaunen:我是用50~100ug/ml 06/03 23:36
11F：→ chaunen:这菌会长得比较快, 时间比DH5a少大概2hr吧 06/03 23:36
12F：推 chaunen:我说XL-10 gold 06/03 23:59
13F：→ chaunen:抱歉 我会错意了 06/04 00:00
14F：推 aeroufo:你涂盘有没有涂乾压，会不会是因为你的菌根本没有乾也会长 06/04 12:45
15F：→ aeroufo:成整盘都是菌，而不是一颗颗的菌，如果是一颗颗的那污染了 06/04 12:46
16F：→ aeroufo:就重新由头开始试吧 06/04 12:47
17F：推 jennychine:Ap很容易就会失效的~建议重配 加上plate也要50ug/ml 06/04 14:10
抱歉，後来再测试一次之後，认为应该是我把有作pUC18(含ampR) transformation
和没作的搞混了...搞笑了，对不起...
※ 编辑: dodomilk 来自: 123.195.13.126 (06/04 19:11)