作者s370515 (appol)
看板Biotech
標題[求救] serum要如何跑SDS-PAGE
時間Wed Jun 2 23:56:17 2010
最近開始在用serum當sample來做western blot
但都發現蛋白再sds-page時都會卡在55kDa的位置
是我用的血清濃度太濃嗎??
還是我加熱變性不夠?
亦或是我gel得濃度太高; 10%的 runing gel
另外以serum sample跑 western blot 要用怎樣的蛋白當control?
actin 行嗎?
這兩天快被這些的好煩喔
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.44.131.28
1F：→ planet7668:heavy chain? 06/03 00:31
2F：推 leoblack:沒有control就自行外加control~大家加等量的protein~ 06/03 01:25
3F：→ leoblack:或大家一起定體積即可~畢竟serum本來就沒有適當的control 06/03 01:26
4F：推 a491332018:先找到合適的稀釋濃度 因為血清內太多蛋白質 如果沒找 06/03 10:54
5F：→ a491332018:到合適濃度 很容易就卡膠XD 至於internal control 06/03 10:55
6F：→ a491332018:你要去找paper中在妳的那種serum中恆定的蛋白即可~ 06/03 10:55
7F：→ chvkimo:actin可以 06/03 11:17
8F：推 leoblack:樓上~為什麼extracellular的serum中會有actin?! 06/03 12:58
9F：→ leoblack:說albumin還比較有機會吧?但會因medium量有差而有差異吧? 06/03 13:00
10F：推 vancent:給你CONDITIONAL MEDIUM跑WB做參考可否? 06/03 15:33
11F：→ vancent:收完MEDIUM後以COLUMN濃縮~定量完後直接loading跑WB 06/03 15:33
12F：→ vancent:INTERNAL CONTROL用PONCEAU S染色拍照就好~ACTIN不可當做 06/03 15:34
13F：→ vancent:INTERNAL CONTROL~不過濃縮要很久~大概兩三小時跑不掉 06/03 15:36
14F：→ vancent:定量定得好就可以了~定準一點吧~我是用BRADFORE定~參考! 06/03 15:37
15F：→ chvkimo:因為隔壁實驗室 有使用actin來當做internal control 06/09 14:16
16F：→ chvkimo:但後來又去找他們討論 認為直接定量 比較合理 不過他們也 06/09 14:17
17F：→ chvkimo:都還是會多跑個actin看看,也許是實驗室長久以來的作法 06/09 14:18
18F：→ chvkimo:還沒更換作法. 在此先道歉 我推文太不經頭腦了 06/09 14:19