作者s370515 (appol)
看板Biotech
标题[求救] serum要如何跑SDS-PAGE
时间Wed Jun 2 23:56:17 2010
最近开始在用serum当sample来做western blot
但都发现蛋白再sds-page时都会卡在55kDa的位置
是我用的血清浓度太浓吗??
还是我加热变性不够?
亦或是我gel得浓度太高; 10%的 runing gel
另外以serum sample跑 western blot 要用怎样的蛋白当control?
actin 行吗?
这两天快被这些的好烦喔
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.44.131.28
1F：→ planet7668:heavy chain? 06/03 00:31
2F：推 leoblack:没有control就自行外加control~大家加等量的protein~ 06/03 01:25
3F：→ leoblack:或大家一起定体积即可~毕竟serum本来就没有适当的control 06/03 01:26
4F：推 a491332018:先找到合适的稀释浓度 因为血清内太多蛋白质 如果没找 06/03 10:54
5F：→ a491332018:到合适浓度 很容易就卡胶XD 至於internal control 06/03 10:55
6F：→ a491332018:你要去找paper中在你的那种serum中恒定的蛋白即可~ 06/03 10:55
7F：→ chvkimo:actin可以 06/03 11:17
8F：推 leoblack:楼上~为什麽extracellular的serum中会有actin?! 06/03 12:58
9F：→ leoblack:说albumin还比较有机会吧?但会因medium量有差而有差异吧? 06/03 13:00
10F：推 vancent:给你CONDITIONAL MEDIUM跑WB做参考可否? 06/03 15:33
11F：→ vancent:收完MEDIUM後以COLUMN浓缩~定量完後直接loading跑WB 06/03 15:33
12F：→ vancent:INTERNAL CONTROL用PONCEAU S染色拍照就好~ACTIN不可当做 06/03 15:34
13F：→ vancent:INTERNAL CONTROL~不过浓缩要很久~大概两三小时跑不掉 06/03 15:36
14F：→ vancent:定量定得好就可以了~定准一点吧~我是用BRADFORE定~参考! 06/03 15:37
15F：→ chvkimo:因为隔壁实验室 有使用actin来当做internal control 06/09 14:16
16F：→ chvkimo:但後来又去找他们讨论 认为直接定量 比较合理 不过他们也 06/09 14:17
17F：→ chvkimo:都还是会多跑个actin看看,也许是实验室长久以来的作法 06/09 14:18
18F：→ chvkimo:还没更换作法. 在此先道歉 我推文太不经头脑了 06/09 14:19