作者sunearth (什麼都在漲)
看板Biotech
標題[問題] <100bp的 sequencing
時間Wed Jun 2 16:49:40 2010
最近老闆想說要sequencing一些小片段的 PCR product (60-80bp)
PCR這些小片段sequence 經過幾次測試之後
都跑得出來 電泳也確實看得到東西
但是送去明欣定序後
說片段太短沒辦法做 他們重定了幾次 都沒辦法讀到
他們建議要>200bp 才有辦法定序
不過老闆看的paper 上頭寫說 QPCR product 可以下去direct sequencing
看起來就是可以讀得到的@@
請問各位大大有啥方法可以讀出這麼小片段的sequence嗎？
目前我是打算把這些PCR product接到plasmid裡面
再讓他們從plasmid上整個下去讀sequence
不過老闆真的很急很急 想問問各位大大有啥其他方法可以更快得到答案
謝謝各位。
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.93.172
1F：推 spirithorse:小片段很好接上,而且方便以後你要繼續ampify他 06/02 18:44
2F：→ spirithorse:以後需要只要抽maxi,再切就好,不用在PCR了 06/02 18:44
3F：推 dodomilk:TA cloning下去作吧 你PCR出來的東西也不一定純 06/02 20:09
4F：→ dodomilk:早上PCR+ligation+塗盤 晚上挑菌 隔天早上作mini 06/02 20:12
5F：推 enisx:PCR product(純化後)->ligation->Transformation塗plate 06/03 07:54
6F：→ enisx:隔天長菌用同一組primer作coloy PCR-->定序 06/03 07:55
7F：推 lulusa:20bp是primer 40bp是反應不良區 定序還沒開始就結束了... 06/07 02:23