作者sunearth (什麽都在涨)
看板Biotech
标题[问题] <100bp的 sequencing
时间Wed Jun 2 16:49:40 2010
最近老板想说要sequencing一些小片段的 PCR product (60-80bp)
PCR这些小片段sequence 经过几次测试之後
都跑得出来 电泳也确实看得到东西
但是送去明欣定序後
说片段太短没办法做 他们重定了几次 都没办法读到
他们建议要>200bp 才有办法定序
不过老板看的paper 上头写说 QPCR product 可以下去direct sequencing
看起来就是可以读得到的@@
请问各位大大有啥方法可以读出这麽小片段的sequence吗？
目前我是打算把这些PCR product接到plasmid里面
再让他们从plasmid上整个下去读sequence
不过老板真的很急很急 想问问各位大大有啥其他方法可以更快得到答案
谢谢各位。
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.93.172
1F：推 spirithorse:小片段很好接上,而且方便以後你要继续ampify他 06/02 18:44
2F：→ spirithorse:以後需要只要抽maxi,再切就好,不用在PCR了 06/02 18:44
3F：推 dodomilk:TA cloning下去作吧 你PCR出来的东西也不一定纯 06/02 20:09
4F：→ dodomilk:早上PCR+ligation+涂盘 晚上挑菌 隔天早上作mini 06/02 20:12
5F：推 enisx:PCR product(纯化後)->ligation->Transformation涂plate 06/03 07:54
6F：→ enisx:隔天长菌用同一组primer作coloy PCR-->定序 06/03 07:55
7F：推 lulusa:20bp是primer 40bp是反应不良区 定序还没开始就结束了... 06/07 02:23