作者biingru (Worker)
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標題Re: [求救] tricine SDS PAGE
時間Thu May 27 05:51:38 2010
※ 引述《power384 ()》之銘言：
: 想請問一下版上的各位
: 為什麼tricine SDS PAGE它需要分內外兩種buffer？
: 有什麼功用在嗎？
: 謝謝回答
看來你是要分離大約小於 30 KDa 的蛋白，
若是你用一般 SDS-PAGE 的話，因為從頭到尾都是用相同 Running Buffer
電流「幾乎」穩定，所以小的蛋白大家都跑得差不多快，分不開。
若是利用 tricine SDS-PAGE，它是利用 Cathode buffer 跟 anthode buffer
我想是你的跑膠系統長得讓你覺得是加在「內」或「外」
說是內外buffer並不恰當
這兩個buffer 差在一個有加 Tricine 一個沒有
還有就是 pH 不一樣
這樣一來，會造成 fake ionic strength gradient
就會造成電流在 cathode 跟 anthode 附近速度不一樣
小的蛋白就可以分得比較開（應該說是超級開，good resolution)
換句話說就是在百分比大約10%的 SDS-PAGE 30KDa 以下根本就是所有的band連在一起
但是用 tricin SDS-PAGE 的話，可以分得很開
若是你要的蛋白是 high hydrophobic，用tricin SDS-PAE 更棒
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 141.225.147.116
1F：推 leoblack:ironic?應該是手誤~是ionic吧?! 05/27 09:16
2F：→ biingru:對不起 手殘 手殘 05/27 10:34
※ 編輯: biingru 來自: 68.18.194.4 (05/27 10:34)
3F：推 leoblack:我也不好意思~meeting slide被老闆刁久了~就職業病了(默) 05/27 10:51
4F：→ turtle24:10%我能分開30kD跟25kD 差不多小於15kD才會黏在一起 05/27 11:30
5F：→ biingru:如果你有15 18 20 25KDa 你跑 t-SDS 你就知道什麼是爽 05/27 14:18
6F：→ biingru:分得超開，比 standard marker 還清楚 05/27 14:19
7F：推 jck0406:專業喔，從哪裡看來的?? 06/04 16:11