作者mythus ()
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標題Re: [討論] 人工細胞能辦到
時間Wed May 26 02:59:07 2010
※ 引述《joeg (認真過好每一天)》之銘言：
: http://udn.com/NEWS/WORLD/WOR4/5616243.shtml
: 裡面圖表的步驟不太了解
: 步驟2
: 四瓶裝基因片段
: --> 我還以為四瓶各裝的是ATCG
: 步驟3
: 利用酵母作用結合各基因
: -->酵母如何作用?
: 我以為是類似連接每的作用, 但是要一個接一個正確, 很難吧!!
請把這張圖表的步驟2跟步驟3忘了吧
每日郵報的記者似乎也沒弄懂
略讀了 sheepfeather 推的報告原文
班門弄斧一下我對這段落的理解
第一步
研究者根據資料庫中菌株DNA資訊 加上一點修改而定下一個合成目標
這個目標是一個1,077,947bp的環形DNA
第二步
將這個目標以1000bp為一單位劃分成1078個單位
各單位的後方再加上80bp相鄰下一單位前80bp的序列 (供後續同源重組之用)
以化學方法合成這1078組DNA片段 (合成的DNA片段各自長1080bp)
將這些片段各自選殖到酵母菌專用質體上 做出1078組質體
第三步
每10組質體為一單位 丟到一隻酵母菌中 並誘導表現其同源重組系統
然後篩選出將十個質體重組成一個的那株菌 得到108株菌
抽質體 得到帶有10,080bp目標DNA序列的108組質體
第四步
同上 得到帶有100,080bp目標DNA序列的11組質體
第五步
11組質體全丟到一隻酵母菌中 篩選出將其全重組成一個質體的那株菌
抽質體 所得質體即是目標: 總長1,077,947bp的環形DNA
: 步驟4
: 分裂後 人造和天然分離
: -->放入人造基因 為何會有天然?
研究者將前述那條1,077,947bp的環形DNA弄進一隻天然的菌體內
加上其原有的DNA 天然呆菌此時擁有兩條DNA
他會以為自己剛完成DNA複製 於是開始細胞分裂 一分為二
兩個子細胞就會一個帶有天然菌本來的DNA 一個帶的則是那條人工合成的DNA
: 步驟5
: --> 如何區分人造和天然? 是用啥技術?
: 謝謝回覆
人工的那組DNA在一開始的設計中就加入了抗抗生素基因及一些watermarks序列
因此加入抗生素後 人造菌依然能生長 天然菌則被抑制了
再根據那些watermarks的特性 確認剩下的菌真的就是人造的
以上 如有謬誤 懇請指正
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.45.209.63
1F：推 akura:是因為化學合成法還沒辦法做到更長的穩定片段 05/26 03:16
2F：→ akura:才要用那麼麻煩的步驟嗎 05/26 03:16
3F：→ mythus:化學合成有合成效率的考量 每一次反應加上一個鹼基的效率 05/26 13:36
4F：→ mythus:大約是99% 因此一般合成個50mer primer產率就剩下60%左右 05/26 13:36
5F：→ mythus:剩下的40%都是有缺少鹼基的雜質 須跑電泳來把他們分離掉 05/26 13:36
6F：→ mythus:但合成的片段越長 電泳分離的能力就越弱 所以在現階段要 05/26 13:36
7F：→ mythus:人工合成大片段DNA還是很困難的 台灣業界接單上限我好像 05/26 13:36
8F：→ mythus:還沒看過超過100mer的 這篇說他一次合成1080bp 老實說我 05/26 13:36
9F：→ mythus:還頗驚訝的 05/26 13:37
10F：推 captdavince:應該是做genome sequencing時也有發展相關合成的技術 05/26 16:29
11F：推 joeg:謝謝你~~完全明白了!!目前的計畫好像就是如此~~ 05/28 22:19