作者mythus ()
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标题Re: [讨论] 人工细胞能办到
时间Wed May 26 02:59:07 2010
※ 引述《joeg (认真过好每一天)》之铭言：
: http://udn.com/NEWS/WORLD/WOR4/5616243.shtml
: 里面图表的步骤不太了解
: 步骤2
: 四瓶装基因片段
: --> 我还以为四瓶各装的是ATCG
: 步骤3
: 利用酵母作用结合各基因
: -->酵母如何作用?
: 我以为是类似连接每的作用, 但是要一个接一个正确, 很难吧!!
请把这张图表的步骤2跟步骤3忘了吧
每日邮报的记者似乎也没弄懂
略读了 sheepfeather 推的报告原文
班门弄斧一下我对这段落的理解
第一步
研究者根据资料库中菌株DNA资讯 加上一点修改而定下一个合成目标
这个目标是一个1,077,947bp的环形DNA
第二步
将这个目标以1000bp为一单位划分成1078个单位
各单位的後方再加上80bp相邻下一单位前80bp的序列 (供後续同源重组之用)
以化学方法合成这1078组DNA片段 (合成的DNA片段各自长1080bp)
将这些片段各自选殖到酵母菌专用质体上 做出1078组质体
第三步
每10组质体为一单位 丢到一只酵母菌中 并诱导表现其同源重组系统
然後筛选出将十个质体重组成一个的那株菌 得到108株菌
抽质体 得到带有10,080bp目标DNA序列的108组质体
第四步
同上 得到带有100,080bp目标DNA序列的11组质体
第五步
11组质体全丢到一只酵母菌中 筛选出将其全重组成一个质体的那株菌
抽质体 所得质体即是目标: 总长1,077,947bp的环形DNA
: 步骤4
: 分裂後 人造和天然分离
: -->放入人造基因 为何会有天然?
研究者将前述那条1,077,947bp的环形DNA弄进一只天然的菌体内
加上其原有的DNA 天然呆菌此时拥有两条DNA
他会以为自己刚完成DNA复制 於是开始细胞分裂 一分为二
两个子细胞就会一个带有天然菌本来的DNA 一个带的则是那条人工合成的DNA
: 步骤5
: --> 如何区分人造和天然? 是用啥技术?
: 谢谢回覆
人工的那组DNA在一开始的设计中就加入了抗抗生素基因及一些watermarks序列
因此加入抗生素後 人造菌依然能生长 天然菌则被抑制了
再根据那些watermarks的特性 确认剩下的菌真的就是人造的
以上 如有谬误 恳请指正
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.45.209.63
1F：推 akura:是因为化学合成法还没办法做到更长的稳定片段 05/26 03:16
2F：→ akura:才要用那麽麻烦的步骤吗 05/26 03:16
3F：→ mythus:化学合成有合成效率的考量 每一次反应加上一个硷基的效率 05/26 13:36
4F：→ mythus:大约是99% 因此一般合成个50mer primer产率就剩下60%左右 05/26 13:36
5F：→ mythus:剩下的40%都是有缺少硷基的杂质 须跑电泳来把他们分离掉 05/26 13:36
6F：→ mythus:但合成的片段越长 电泳分离的能力就越弱 所以在现阶段要 05/26 13:36
7F：→ mythus:人工合成大片段DNA还是很困难的 台湾业界接单上限我好像 05/26 13:36
8F：→ mythus:还没看过超过100mer的 这篇说他一次合成1080bp 老实说我 05/26 13:36
9F：→ mythus:还颇惊讶的 05/26 13:37
10F：推 captdavince:应该是做genome sequencing时也有发展相关合成的技术 05/26 16:29
11F：推 joeg:谢谢你~~完全明白了!!目前的计画好像就是如此~~ 05/28 22:19