作者DJHINN (dj)
看板Biotech
標題[求救]關於 長片段的TA-cloning
時間Sat May 22 02:35:31 2010
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
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我要將 差不多 6.3k的 PCR product insert 入 3.6 K的 TA vector
但是 頻頻失敗
目前用過的 莫耳比為
6.3K product : 3.6K vector = 1:3
我是將 vector 當作 insert看待
因為 product>>>>> vector
但是 仍是失敗
有學姊是比較反其道而行
他的比例是
6K product : 3K vector = 8 : 1 (接下來會試看看)
做出來了， 可是我不知道 其理論是甚麼!?
請有做過類似實驗的大大 給個幫助一下 ~"~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 59.121.1.64
1F：推 TOTO:把大的insert當作vector，特殊的insert可以換一下cell看看 05/22 03:47
2F：推 bluecsky:因為你合起來大概快10k 有時候比較大要一點運氣 05/22 05:05
3F：→ bluecsky:可以嘗試heat shock時間拉長跟recovery時間拉長 05/22 05:06
4F：推 leoblack:推1F,不要被名稱給侷限了,誰比較長,誰就當vector 05/22 08:09
5F：推 jabari:primer放切位直接用ligase會不會比較快 05/22 12:14
6F：→ DJHINN:感謝解答 值得玩味 再試看看 05/22 13:36