作者championelmo (elmo軒)
看板Biotech
標題[求救] 如何將空vector轉大量?
時間Fri May 21 17:49:21 2010
各位朋友大家好~~~
小朋友我有一個問題想請教
我最近要做clone
要把PCR的片段放到之前學姊留下來的空載體
空載體的型式 我想它是Plasmid
但剩下的不多
老師說 把它加水 再拿去做transform 這樣就可以有大量了
因為從沒做過這部分 我可以理解Transform之後可以有很多的colony再去抽plasmid
但是加水.... 這部分我不懂 是要加多少 一定不是隨興所至吧~~
可以請大家幫我看看 或是有其他方法把我所剩無幾的vector變多~~~~
謝謝大家!!
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◆ From: 140.124.250.117
1F：→ bluecsky:答 : 就是隨興所至 要不然直接把competent cell丟到那個 05/21 17:59
2F：→ bluecsky:空管子去也可以 單純的plasmid去transform效率一般都很高 05/21 18:00
3F：→ bluecsky:不過不要加太多就是了 看你開心 不要加個1ml就好了.. 05/21 18:00
4F：→ bluecsky:其實要是不是空管子的話 取各1ul就很夠拿來轉了.. 05/21 18:01
5F：→ saviora:別加太濃 要不然clone長太多你會欲哭無淚 05/21 18:33
6F：推 tsubasawolfy:個位數ng的plasmid就可以長的欣欣向榮.. 05/21 19:20
7F：→ tsubasawolfy:如果太濃明天你會看到整盤的細菌平原 05/21 19:20
8F：→ spirithorse:取一點分裝dilute,用光就沒了,plasmid太濃的話不會長 05/21 19:21
9F：推 bluecsky:其實你也可以不要全部的pellet都塗下去阿.. 05/21 19:25
10F：→ bluecsky:雖然說只要幾ng就很夠了 不過我也不知道他說得很少 05/21 19:26
11F：→ bluecsky:是多少 是體積都少到沒得吸那種 還是...? 05/21 19:26
12F：→ bluecsky:不然其實去定各量也不錯 雖然做久了都不太管這個XD 05/21 19:27
13F：→ bluecsky:一般transform純plasmid的話 我是不會把菌全部都塗下去 05/21 19:27
14F：→ championelmo:我之前做transform是用75lamda的勝任細胞+5的DNA 05/21 22:20
15F：→ championelmo:所以我取1 lamda的plasmid在家4 lamda的水去轉 05/21 22:21
16F：→ turtle24:10ng的plasmid就夠了 細菌製備良好的話長幾百顆沒問題 05/21 22:22
17F：→ championelmo:請問這樣的量ok嗎? 還是勝任細胞這樣太多了? 05/21 22:22
18F：→ championelmo:我不知道載體的濃度多少 05/21 22:23
19F：推 bluecsky:可以定量阿 很少體積的話 去看有沒有naoa-drop 05/21 22:33
20F：→ bluecsky:我倒覺得你不用想得太多 就取一點點去轉 要是怕長太多 05/21 22:34
21F：→ bluecsky:你轉完後就不要全部的菌都塗盤就好... 05/21 22:34
22F：→ championelmo:ok 我先試試看 謝謝大家的幫忙 05/22 12:14
23F：→ chaunen:total>500ng plasmid的話, 建議四區劃線 05/22 23:10