作者championelmo (elmo轩)
看板Biotech
标题[求救] 如何将空vector转大量?
时间Fri May 21 17:49:21 2010
各位朋友大家好~~~
小朋友我有一个问题想请教
我最近要做clone
要把PCR的片段放到之前学姊留下来的空载体
空载体的型式 我想它是Plasmid
但剩下的不多
老师说 把它加水 再拿去做transform 这样就可以有大量了
因为从没做过这部分 我可以理解Transform之後可以有很多的colony再去抽plasmid
但是加水.... 这部分我不懂 是要加多少 一定不是随兴所至吧~~
可以请大家帮我看看 或是有其他方法把我所剩无几的vector变多~~~~
谢谢大家!!
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◆ From: 140.124.250.117
1F：→ bluecsky:答 : 就是随兴所至 要不然直接把competent cell丢到那个 05/21 17:59
2F：→ bluecsky:空管子去也可以 单纯的plasmid去transform效率一般都很高 05/21 18:00
3F：→ bluecsky:不过不要加太多就是了 看你开心 不要加个1ml就好了.. 05/21 18:00
4F：→ bluecsky:其实要是不是空管子的话 取各1ul就很够拿来转了.. 05/21 18:01
5F：→ saviora:别加太浓 要不然clone长太多你会欲哭无泪 05/21 18:33
6F：推 tsubasawolfy:个位数ng的plasmid就可以长的欣欣向荣.. 05/21 19:20
7F：→ tsubasawolfy:如果太浓明天你会看到整盘的细菌平原 05/21 19:20
8F：→ spirithorse:取一点分装dilute,用光就没了,plasmid太浓的话不会长 05/21 19:21
9F：推 bluecsky:其实你也可以不要全部的pellet都涂下去阿.. 05/21 19:25
10F：→ bluecsky:虽然说只要几ng就很够了 不过我也不知道他说得很少 05/21 19:26
11F：→ bluecsky:是多少 是体积都少到没得吸那种 还是...? 05/21 19:26
12F：→ bluecsky:不然其实去定各量也不错 虽然做久了都不太管这个XD 05/21 19:27
13F：→ bluecsky:一般transform纯plasmid的话 我是不会把菌全部都涂下去 05/21 19:27
14F：→ championelmo:我之前做transform是用75lamda的胜任细胞+5的DNA 05/21 22:20
15F：→ championelmo:所以我取1 lamda的plasmid在家4 lamda的水去转 05/21 22:21
16F：→ turtle24:10ng的plasmid就够了 细菌制备良好的话长几百颗没问题 05/21 22:22
17F：→ championelmo:请问这样的量ok吗? 还是胜任细胞这样太多了? 05/21 22:22
18F：→ championelmo:我不知道载体的浓度多少 05/21 22:23
19F：推 bluecsky:可以定量阿 很少体积的话 去看有没有naoa-drop 05/21 22:33
20F：→ bluecsky:我倒觉得你不用想得太多 就取一点点去转 要是怕长太多 05/21 22:34
21F：→ bluecsky:你转完後就不要全部的菌都涂盘就好... 05/21 22:34
22F：→ championelmo:ok 我先试试看 谢谢大家的帮忙 05/22 12:14
23F：→ chaunen:total>500ng plasmid的话, 建议四区划线 05/22 23:10