※ 引述《CCDMer (Best)》之銘言： : 各位板大好: : 最近遇到了一個很頭痛的問題~又急著又無奈所以只能來這求救 : 我使用pET101接上的我的目標基因~用BL21(DE3)進行誘導 : 我的方式是pET101/BL21隔夜培養後, 隔天再取1CC加入到新的LB medium : 誘導到OD=0.5~0.6 ,加入IPTG(1mM)後, 37C培養3~6小時~跑SDS-PAGE : 降溫誘導,加入glucose這些條件,這個我都做過了,我的蛋白質約在14kDa : 也不可能是包涵體的問題,因為我是連誘導都誘導不出來,試條件快兩個月了 : 是因為分子量小所以誘導不出來嗎? 換別株相同的pET101的clone也是無法誘導 : ,想說是不是pET101無法誘導小蛋白質~~我真的沒有辦法了~各位板大救救我好嗎? 我直接回好了， 這種蛋白表達本來就沒有一定的對或錯的方法 我看你的步驟也沒問題 我把我的經驗告訴你... 你接上 plasmid 之後不知到有沒有先定序，檢查看看有沒有 in frame 若是有 in frame 另外你是用 pet system，這裡面有隱藏版暗黑 那就是經過 transformation 後，若你分盤養個兩代或三代 也就是說你把tranformation成功的 colony 挑起來，劃在新的盤子上，然後又挑出來 養再另一個盤子上 你的 plasmid 的 promotor sequence 會被重組 亦或是你把他存成 glycerol stock，挑出來後也會被重組 廠商的菌株資料沒寫 打電話問半天，他們才吱吱嗚嗚的承認會有這樣的狀況 但是 "very seldom" 試試看把 plasmid transfrom into new BL21(DE3) 然後直接挑colony到 broth --

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