※ 引述《CCDMer (Best)》之铭言： : 各位板大好: : 最近遇到了一个很头痛的问题~又急着又无奈所以只能来这求救 : 我使用pET101接上的我的目标基因~用BL21(DE3)进行诱导 : 我的方式是pET101/BL21隔夜培养後, 隔天再取1CC加入到新的LB medium : 诱导到OD=0.5~0.6 ,加入IPTG(1mM)後, 37C培养3~6小时~跑SDS-PAGE : 降温诱导,加入glucose这些条件,这个我都做过了,我的蛋白质约在14kDa : 也不可能是包涵体的问题,因为我是连诱导都诱导不出来,试条件快两个月了 : 是因为分子量小所以诱导不出来吗? 换别株相同的pET101的clone也是无法诱导 : ,想说是不是pET101无法诱导小蛋白质~~我真的没有办法了~各位板大救救我好吗? 我直接回好了， 这种蛋白表达本来就没有一定的对或错的方法 我看你的步骤也没问题 我把我的经验告诉你... 你接上 plasmid 之後不知到有没有先定序，检查看看有没有 in frame 若是有 in frame 另外你是用 pet system，这里面有隐藏版暗黑 那就是经过 transformation 後，若你分盘养个两代或三代 也就是说你把tranformation成功的 colony 挑起来，划在新的盘子上，然後又挑出来 养再另一个盘子上 你的 plasmid 的 promotor sequence 会被重组 亦或是你把他存成 glycerol stock，挑出来後也会被重组 厂商的菌株资料没写 打电话问半天，他们才吱吱呜呜的承认会有这样的状况 但是 "very seldom" 试试看把 plasmid transfrom into new BL21(DE3) 然後直接挑colony到 broth --

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